| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 引言 | 第8-21页 |
| ·奶牛乳房炎概述 | 第8页 |
| ·引起奶牛乳房炎的病原菌及其影响因素 | 第8-9页 |
| ·病原菌 | 第8页 |
| ·其它影响因素 | 第8-9页 |
| ·奶牛乳房炎的免疫学机制 | 第9-11页 |
| ·物理防御屏障 | 第9页 |
| ·免疫细胞防御机制 | 第9-10页 |
| ·体液免疫机制 | 第10-11页 |
| ·奶牛金黄色葡萄球菌性乳房炎研究现状 | 第11-15页 |
| ·金黄色葡萄球菌相关毒力因子 | 第11-12页 |
| ·金黄色葡萄球菌疫苗的相关研究进展 | 第12-15页 |
| ·IFN-Γ研究进展 | 第15-20页 |
| ·牛IFN-γ结构特点 | 第16页 |
| ·IFN-γ信号传导的分子机制 | 第16-17页 |
| ·IFN-γ的生物学活性 | 第17-19页 |
| ·IFN-γ国内外研究现状 | 第19-20页 |
| ·实验的目的和意义 | 第20-21页 |
| 2 实验一 牛IFN-Γ基因的克隆及序列分析 | 第21-34页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·实验动物 | 第21页 |
| ·载体及菌种 | 第21页 |
| ·试剂与工具酶 | 第21页 |
| ·试验主要仪器 | 第21页 |
| ·培养基与试剂 | 第21-23页 |
| ·实验流程 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-30页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·目的片段的扩增及重组载体的构建 | 第24-30页 |
| ·结果 | 第30-34页 |
| ·牛外周血淋巴细胞总RNA 完整性的鉴定 | 第30-31页 |
| ·RT-PCR 扩增结果 | 第31页 |
| ·重组质粒pMD19-T-bovIFN-γ的鉴定结果 | 第31-33页 |
| ·重组质粒pET32a-bovIFN-γ的酶切鉴定结果 | 第33页 |
| ·重组质粒pET32a-bovIFN-γ的序列测定结果 | 第33-34页 |
| 3 实验二：牛IFN-Γ与FNBPA D 区基因重组质粒的构建及原核表达 | 第34-51页 |
| ·实验材料 | 第34-38页 |
| ·质粒和菌种 | 第34页 |
| ·工具酶及相关试剂 | 第34-35页 |
| ·表达载体 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·试剂配制 | 第36-38页 |
| ·实验流程 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-45页 |
| ·FnBPA 基因与BovIFN-γ基因共表达载体的构建 | 第38-42页 |
| ·融合蛋白的表达及分析 | 第42-44页 |
| ·表达蛋白的纯化及分析 | 第44-45页 |
| ·ELISA 检测表达产物的活性 | 第45页 |
| ·实验结果 | 第45-51页 |
| ·PCR 扩增FnBPA 基因结果 | 第45-46页 |
| ·重组载体的PCR 鉴定及双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组质粒pET32a-bovIFN-γ-FnBPA 及双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组质粒pET32a-bovIFN-γ-FnBPA 序列测定结果 | 第48页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 电泳检测结果 | 第48-49页 |
| ·目的蛋白纯化结果 | 第49-50页 |
| ·表达产物的ELISA 检测结果 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-52页 |
| ·BOVIFN-Γ基因的克隆 | 第51页 |
| ·牛外周血淋巴细胞的培养 | 第51-52页 |
| ·FNBPA 基因与BOVIFN-Γ基因融合表达质粒的构建 | 第52页 |
| ·表达蛋白的免疫反应性鉴定 | 第52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-59页 |
| 作者简介 | 第59页 |
