| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-25页 |
| 1 番茄茎基腐病及腐霉病害 | 第12-20页 |
| ·番茄茎基腐病的危害及其主要症状 | 第12-13页 |
| ·番茄茎基腐病的病原研究 | 第13页 |
| ·番茄茎基腐病的传播途径及其发病规律 | 第13页 |
| ·番茄茎基腐病害防治 | 第13-14页 |
| ·腐霉病害的防治 | 第14-16页 |
| ·腐霉致病机制研究进展 | 第16-20页 |
| ·水解酶类 | 第16-17页 |
| ·信号转导因子 | 第17页 |
| ·机械作用 | 第17-18页 |
| ·生长代谢物质 | 第18页 |
| ·毒素 | 第18-20页 |
| 2 果胶裂解酶研究进展 | 第20-21页 |
| ·果胶及果胶酶 | 第20页 |
| ·果胶裂解酶 | 第20-21页 |
| ·果胶裂解酶的作用机理 | 第21页 |
| 3 原核表达系统 | 第21-23页 |
| ·大肠杆菌 | 第21-22页 |
| ·原核表达载体上的重要原件 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌表达载体的种类 | 第23页 |
| 4 本研究的目的意义 | 第23-25页 |
| 第二章 终极腐霉鉴定及果胶裂解酶酶活检测 | 第25-32页 |
| 1 材料与方法 | 第25-28页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·仪器设备 | 第25-26页 |
| ·培养基及溶液 | 第26页 |
| ·菌体培养和保存 | 第26-27页 |
| ·CTAB 法提取 Pythium ultimum 基因组 DNA | 第27页 |
| ·Pythium ultimum ITS 序列扩增 | 第27页 |
| ·目的片段回收 | 第27-28页 |
| ·果胶裂解酶粗酶制备 | 第28页 |
| ·果胶裂解酶酶活测定 | 第28页 |
| 2 结果分析 | 第28-31页 |
| ·终极腐霉形态鉴定 | 第28-29页 |
| ·终极腐霉 ITS 序列鉴定 | 第29-30页 |
| ·果胶裂解酶酶活测定 | 第30页 |
| ·标准曲线与酶活 | 第30页 |
| ·菌丝干重 | 第30-31页 |
| 3 小结与讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 终极腐霉果胶裂解酶基因原核表达 | 第32-44页 |
| 1 材料与方法 | 第32-38页 |
| ·菌株和质粒 | 第32页 |
| ·试剂 | 第32页 |
| ·仪器 | 第32-33页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第33-34页 |
| ·菌体培养和保存 | 第34页 |
| ·CTAB 法提取终极腐霉基因组 DNA | 第34页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第34-35页 |
| ·目的基因选择及引物设计 | 第35页 |
| ·果胶裂解酶基因序列克隆 | 第35页 |
| ·果胶裂解酶基因表达序列扩增 | 第35-36页 |
| ·目的基因连接转化 | 第36页 |
| ·阳性转化子鉴定 | 第36-37页 |
| ·果胶裂解酶诱导表达 | 第37页 |
| ·直接法裂解细胞提取蛋白 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶的制备 | 第37-38页 |
| ·诱导蛋白检测： | 第38页 |
| 2 结果分析 | 第38-44页 |
| ·果胶裂解酶基因克隆 | 第38-39页 |
| ·信号肽分析 | 第39页 |
| ·表达序列扩增 | 第39-40页 |
| ·果胶裂解酶基因转化及阳性转化子鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组子转化 | 第41-42页 |
| ·果胶裂解酶 PAGE | 第42页 |
| ·小结与讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 终极腐霉致病性分析 | 第44-49页 |
| 1 材料与方法 | 第44-46页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·培养基及溶液 | 第44页 |
| ·RNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·反转录 | 第45页 |
| ·Real Time-PCR | 第45-46页 |
| 2 结果分析 | 第46-48页 |
| ·接菌结果 | 第46-47页 |
| ·荧光定量分析结果 | 第47-48页 |
| 3 小结与讨论 | 第48-49页 |
| 第五章 终极腐霉果胶裂解酶基因敲除载体的构建 | 第49-57页 |
| 1 材料与方法 | 第49-53页 |
| ·菌种和载体 | 第49页 |
| ·酶和生化试剂 | 第49页 |
| ·实验仪器 | 第49页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第49页 |
| ·菌体培养及保存 | 第49页 |
| ·CTAB 法小量提取终极腐霉基因组 DNA | 第49页 |
| ·载体质粒提取 | 第49页 |
| ·目的基因选择及引物设计 | 第49-50页 |
| ·果胶裂解酶左右臂扩增 | 第50-51页 |
| ·克隆载体连接 | 第51页 |
| ·目的基因克隆转化 | 第51页 |
| ·果胶裂解酶基因敲除载体的构建 | 第51-53页 |
| 2 结果分析 | 第53-56页 |
| ·终极腐霉潮霉素 B 筛选浓度 | 第53-54页 |
| ·P. ultimum 果胶裂解酶基因及上下游序列的克隆 | 第54-56页 |
| 3 小结与讨论 | 第56-57页 |
| 第六章 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 作者简介 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
