| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-22页 |
| 1.1 非洲猪瘟 | 第14-15页 |
| 1.1.1 非洲猪瘟的流行与分布 | 第14页 |
| 1.1.2 易感动物与传播途径 | 第14-15页 |
| 1.2 非洲猪瘟病毒 | 第15-18页 |
| 1.2.1 病毒形态结构及分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 多基因家族 | 第16页 |
| 1.2.3 病毒其他蛋白及其功能 | 第16-17页 |
| 1.2.4 病毒培养特性及理化特性 | 第17-18页 |
| 1.3 非洲猪瘟疫苗的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 非洲猪瘟的诊断方法 | 第19页 |
| 1.5 重组酶聚合酶扩增技术(RPA) | 第19-21页 |
| 1.5.1 扩增原理 | 第19-20页 |
| 1.5.2 几种常见核酸扩增方法的比较 | 第20-21页 |
| 1.5.3 应用 | 第21页 |
| 1.6 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 第二章 ASFV MGF360 重要免疫抑制基因的筛选 | 第22-36页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株、载体和细胞 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 | 第22页 |
| 2.1.3 主要仪器与设备 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 ASFV MGF360-12L、-13L、-14L基因合成 | 第23页 |
| 2.2.2 pcDNA3.1 重组质粒的构建与鉴定 | 第23-27页 |
| 2.2.3 重组质粒转染细胞 | 第27-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.3.1 12 L、13L、14L基因片段的扩增 | 第30页 |
| 2.3.2 pcDNA3.1 重组质粒的鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 293 T、PK15 细胞的培养 | 第31页 |
| 2.3.4 STING、c GAS比例的优化 | 第31-33页 |
| 2.3.5 免疫抑制基因MGF360-12L、-13L、-14L的筛选 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 第三章 ASFV MGF360-12L、-13L基因基础RPA检测方法的初步建立 | 第36-46页 |
| 3.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.1.1 载体、病毒株和临床样品 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂与耗材 | 第36页 |
| 3.1.3 主要仪器与设备 | 第36-37页 |
| 3.2 方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 标准质粒拷贝数的确定 | 第37页 |
| 3.2.2 12 L、13L基因基础RPA、PCR及荧光定量PCR的引物设计 | 第37页 |
| 3.2.3 基础RPA检测方法的建立及条件优化 | 第37-38页 |
| 3.2.4 基础RPA检测方法的灵敏性实验 | 第38页 |
| 3.2.5 RPA检测方法的特异性实验 | 第38-39页 |
| 3.2.6 RPA检测方法的稳定性实验 | 第39页 |
| 3.2.7 RPA检测方法初步临床应用 | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-45页 |
| 3.3.1 标准质粒拷贝数的计算 | 第39页 |
| 3.3.2 RPA检测方法引物的筛选 | 第39-40页 |
| 3.3.3 RPA检测方法反应条件的优化 | 第40-41页 |
| 3.3.4 RPA检测方法灵敏性检测 | 第41-43页 |
| 3.3.5 RPA检测方法特异性检测 | 第43-44页 |
| 3.3.6 RPA检测方法稳定性试验 | 第44页 |
| 3.3.7 RPA检测方法初步临床应用 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 ASFV MGF360 免疫抑制蛋白12L、13L的原核表达与纯化 | 第46-57页 |
| 4.1 材料 | 第46-48页 |
| 4.1.1 菌株与载体 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂与耗材 | 第46页 |
| 4.1.3 主要仪器与设备 | 第46-47页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第47-48页 |
| 4.2 方法 | 第48-52页 |
| 4.2.1 12 L、13L基因原核表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 4.2.2 12 L、13L蛋白的诱导表达 | 第50页 |
| 4.2.3 重组蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 4.2.4 重组蛋白的浓缩与内毒素去除 | 第51页 |
| 4.2.5 重组蛋白的浓度测定 | 第51-52页 |
| 4.2.6 纯化蛋白的鉴定 | 第52页 |
| 4.3 结果与分析 | 第52-55页 |
| 4.3.1 原核重组质粒的酶切鉴定 | 第52-53页 |
| 4.3.2 重组蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 4.3.3 重组蛋白的纯化与鉴定 | 第54-55页 |
| 4.3.4 重组蛋白浓度的测定 | 第55页 |
| 4.4 讨论 | 第55-57页 |
| 第五章 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |
