| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 猪流行性腹泻概述 | 第13页 |
| 1.2 猪流行性腹泻病毒分类与结构 | 第13-15页 |
| 1.2.1 猪流行性腹泻病毒的分类 | 第13页 |
| 1.2.2 猪流行性腹泻病毒的基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.2.3 猪流行性腹泻病毒编码的蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3 猪流行性腹泻的流行情况 | 第15-16页 |
| 1.4 猪流行性腹泻的临床症状、病理变化及发病机理 | 第16页 |
| 1.5 猪流行性腹泻的诊断方法 | 第16-18页 |
| 1.5.1 病原学诊断方法 | 第16-17页 |
| 1.5.2 血清学诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.6 猪流行性腹泻病毒的免疫学研究概况 | 第18-20页 |
| 1.6.1 PEDV引起的机体免疫应答 | 第18-19页 |
| 1.6.2 PEDV疫苗研究 | 第19-20页 |
| 1.6.2.1 灭活疫苗 | 第19页 |
| 1.6.2.2 弱毒疫苗 | 第19页 |
| 1.6.2.3 基因工程疫苗 | 第19-20页 |
| 1.6.2.4 乳酸菌疫苗 | 第20页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 第二章 基于S1 蛋白的PEDV IgA和 IgG抗体间接ELISA方法的建立 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 2.1.1 主要材料与血清 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器与设备 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂及配制 | 第22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 重组蛋白真核表达质粒的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.1.1 融合表达S1 蛋白和Fc片段引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| 2.2.1.2 目的片段的PCR扩增 | 第23页 |
| 2.2.1.3 目的片段的双酶切、连接与鉴定 | 第23页 |
| 2.2.2 重组蛋白的表达、纯化与鉴定 | 第23-24页 |
| 2.2.3 间接ELISA方法的建立及反应条件的优化 | 第24-25页 |
| 2.2.3.1 间接ELISA方法操作步骤 | 第24页 |
| 2.2.3.2 最佳抗原包被浓度与血清稀释度的确定 | 第24页 |
| 2.2.3.3 最佳二抗稀释度的确定 | 第24页 |
| 2.2.3.4 最佳二抗孵育时间的确定 | 第24-25页 |
| 2.2.4 阴阳临界值(cut-off value)确定 | 第25页 |
| 2.2.5 特异性试验 | 第25页 |
| 2.2.6 敏感性试验 | 第25页 |
| 2.2.7 重复性试验 | 第25页 |
| 2.2.8 间接ELISA方法与IFA的相关性试验 | 第25页 |
| 2.3 实验结果 | 第25-33页 |
| 2.3.1 目的片段的PCR扩增结果 | 第25-26页 |
| 2.3.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第26页 |
| 2.3.3 S1 蛋白表达、纯化与鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 间接ELISA方法的建立及反应条件的确定 | 第27-30页 |
| 2.3.4.1 最佳抗原包被浓度与血清稀释度的确定 | 第27-28页 |
| 2.3.4.2 最佳二抗稀释度的确定 | 第28-29页 |
| 2.3.4.3 最佳二抗孵育时间的确定 | 第29页 |
| 2.3.4.4 最佳反应条件 | 第29-30页 |
| 2.3.5 阴阳临界值(cut-off value)的确定 | 第30页 |
| 2.3.6 特异性试验 | 第30-31页 |
| 2.3.7 敏感性试验 | 第31页 |
| 2.3.8 重复性试验 | 第31-32页 |
| 2.3.9 间接ELISA方法与IFA的相关性试验 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 猪流行性腹泻病毒灭活疫苗被动免疫评价 | 第35-49页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 主要实验材料 | 第35页 |
| 3.1.2 主要仪器与设备 | 第35-36页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-40页 |
| 3.2.1 分组与免疫 | 第36-37页 |
| 3.2.2 攻毒试验 | 第37页 |
| 3.2.3 样品的采集与处理 | 第37-40页 |
| 3.2.3.1 仔猪排毒情况测定 | 第37-38页 |
| 3.2.3.2 组织病理学观察 | 第38-39页 |
| 3.2.3.3 免疫组化染色 | 第39页 |
| 3.2.3.4 肠组织PEDV含量测定 | 第39页 |
| 3.2.3.5 仔猪与母猪血清抗体间接ELISA检测 | 第39页 |
| 3.2.3.6 中和抗体水平检测 | 第39-40页 |
| 3.3 实验结果 | 第40-46页 |
| 3.3.1 仔猪临床症状统计 | 第40页 |
| 3.3.2 仔猪剖检与病理组织检测结果 | 第40-42页 |
| 3.3.3 仔猪肛拭子病毒RNA定量检测结果 | 第42-43页 |
| 3.3.4 仔猪肠组织PEDV含量检测结果 | 第43页 |
| 3.3.5 母猪血清IgG、IgA和中和抗体检测结果 | 第43-45页 |
| 3.3.6 仔猪血清IgG、IgA和中和抗体检测结果 | 第45-46页 |
| 3.3.7 攻毒前仔猪血清Ig G、IgA和中和抗体检测结果 | 第46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-49页 |
| 第四章 全文结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 作者简历 | 第58页 |
