| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 综述 | 第10-17页 |
| 1.1 蜱的分类和危害 | 第10-11页 |
| 1.2 蜱的寄生和防治 | 第11-12页 |
| 1.3 胚胎发育 | 第12页 |
| 1.4 组织蛋白酶 | 第12-13页 |
| 1.5 长角血蜱 | 第13页 |
| 1.6 卵黄发生和卵黄蛋白 | 第13-14页 |
| 1.7 实时荧光定量PCR技术 | 第14-15页 |
| 1.8 RNA干扰技术 | 第15页 |
| 1.9 研究意义和展望 | 第15-17页 |
| 第二章 长角血蜱胚胎发育中组织蛋白酶D的动态变化 | 第17-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第17页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第17页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 实验耗材 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 组织蛋白酶D荧光定量PCR引物设计 | 第18页 |
| 2.2.2 引物合成和PCR | 第18-19页 |
| 2.2.3 目的条带的胶回收 | 第19-20页 |
| 2.2.4 连接转化 | 第20-21页 |
| 2.2.5 总RNA的提取 | 第21-22页 |
| 2.2.6 反转录 | 第22页 |
| 2.2.7 BCA法测蛋白浓度 | 第22-23页 |
| 2.2.8 荧光定量PCR | 第23-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 组织蛋白酶D基因片段的扩增 | 第24页 |
| 2.3.2 组织蛋白酶D定量基因的菌落PCR片段扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.3 组织蛋白酶D定量基因测序结果比对 | 第25页 |
| 2.3.4 组织蛋白酶D基因在不同发育天数下的酶活性结果 | 第25-26页 |
| 2.3.5 组织蛋白酶D基因在不同发育天数下的定量结果 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 干扰组织蛋白酶D对长角血蜱胚胎发育的影响 | 第29-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第29页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 3.1.3 实验耗材 | 第30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-38页 |
| 3.2.1 组织蛋白酶D干扰引物设计 | 第30-31页 |
| 3.2.2 目的条带的胶回收 | 第31页 |
| 3.2.3 连接转化 | 第31-33页 |
| 3.2.4 进行饱血掉落后的成蜱干扰实验 | 第33-35页 |
| 3.2.5 进行饥饿成蜱干扰实验 | 第35-38页 |
| 3.3 实验结果 | 第38-46页 |
| 3.3.1 组织蛋白酶D干扰基因的片段扩增 | 第38-39页 |
| 3.3.2 组织蛋白酶D干扰基因的菌落PCR片段扩增 | 第39页 |
| 3.3.3 组织蛋白D干扰基因测序结果比对 | 第39-40页 |
| 3.3.4 带T7启动子干扰基因的片段扩增 | 第40-42页 |
| 3.3.5 饱血雌蜱组织蛋白酶D干扰效果 | 第42-44页 |
| 3.3.6 饥饿雌蜱组织蛋白酶D干扰效果 | 第44-46页 |
| 3.4 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 长角血蜱卵粗提物与组织蛋白酶D及其抑制剂的孵育 | 第47-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第47页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第47页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第47页 |
| 4.1.3 实验耗材 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 与抑制剂进行孵育 | 第47-48页 |
| 4.2.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第48-49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-52页 |
| 4.3.1 提取13天的卵粗提物与10mM PepstainA孵育 | 第49-50页 |
| 4.3.2 提取13天的卵粗提物与不同酶活力的组织蛋白酶D孵育 | 第50-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果 | 第65-66页 |
