| 摘要 | 第2-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 类胰岛素生长因子系统研究进展 | 第13-22页 |
| 1.1 类胰岛素生长因子系统概述 | 第13-14页 |
| 1.2 类胰岛素生长因子系统成员结构特征 | 第14-17页 |
| 1.2.1 类胰岛素生长因子基因结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 类胰岛素生长因子受体基因结构 | 第15页 |
| 1.2.3 类胰岛素生长因子结合蛋白基因结构 | 第15-17页 |
| 1.3 类胰岛素生长因子系统信号通路 | 第17-18页 |
| 1.4 类胰岛素生长因子系统功能及调控 | 第18-20页 |
| 1.5 立论依据与研究目的 | 第20-22页 |
| 第二章 缢蛏ILPR基因两个可变剪切体克隆与表达分析 | 第22-47页 |
| 2.1 材料和方法 | 第22-33页 |
| 2.1.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.2 仪器与试剂 | 第23-26页 |
| 2.1.3 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.1.3.1 总RNA提取 | 第26页 |
| 2.1.3.2 第一链cDNA模板合成 | 第26页 |
| 2.1.3.3 ILPR基因片段获得 | 第26-27页 |
| 2.1.3.4 ILPR cDNA 3'末端快速扩增 | 第27-28页 |
| 2.1.3.5 荧光定量PCR | 第28-29页 |
| 2.1.3.6 数据分析 | 第29页 |
| 2.1.3.7 LCL结构域原核表达载体构建 | 第29-30页 |
| 2.1.3.8 LCL结构域原核表达 | 第30-31页 |
| 2.1.3.9 GST-LCL重组蛋白纯化 | 第31页 |
| 2.1.3.10 ILP多肽真核表达载体构建 | 第31-32页 |
| 2.1.3.11 ILP多肽瞬时表达 | 第32页 |
| 2.1.3.12 GST pull-down | 第32-33页 |
| 2.2 结果 | 第33-41页 |
| 2.2.1 缢蛏ILPR和sILPR基因序列特征分析 | 第33-36页 |
| 2.2.2 缢蛏ILPR和sILPR基因时空表达分析 | 第36-37页 |
| 2.2.3 LCL结构域原核表达及蛋白纯化 | 第37-41页 |
| 2.2.4 ILP多肽载体构建及真核表达 | 第41页 |
| 2.2.5 GST-LCL与ILP多肽相互作用 | 第41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-47页 |
| 第三章 缢蛏ILPR基因生长性状相关SNP筛选及图谱定位 | 第47-56页 |
| 3.1 材料和方法 | 第47-49页 |
| 3.1.1 实验对象及数据测量 | 第47-48页 |
| 3.1.2 实验仪器与试剂 | 第48页 |
| 3.1.3 缢蛏基因组DNA和RNA提取及cDNA链合成 | 第48页 |
| 3.1.4 外显子区域SNP位点筛选 | 第48页 |
| 3.1.5 基因遗传连锁图谱定位 | 第48-49页 |
| 3.1.6 数据分析 | 第49页 |
| 3.2 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.2.1 ILPR基因外显子区域SNP位点筛选 | 第49-50页 |
| 3.2.2 ILPR基因部分DNA序列扩增及多态性分析 | 第50-51页 |
| 3.2.3 ILPR基因SNP位点与生长性状关联分析 | 第51页 |
| 3.2.4 ILPR基因SNP位点连锁不平衡分析 | 第51页 |
| 3.2.5 ILPR基因在缢蛏遗传连锁图谱定位 | 第51-52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-56页 |
| 第四章 缢蛏FOXO基因表达分析和生长性状相关SNP位点筛选及图谱定位 | 第56-69页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-58页 |
| 4.1.1 材料 | 第56页 |
| 4.1.2 仪器与试剂 | 第56页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第56-58页 |
| 4.1.3.1 缢蛏FOXO基因片段获得 | 第56-57页 |
| 4.1.3.2 SNP多态性及其与生长性状关联分析 | 第57页 |
| 4.1.3.3 基因遗传图谱定位 | 第57页 |
| 4.1.3.4 数据分析 | 第57-58页 |
| 4.1.3.5 荧光定量PCR | 第58页 |
| 4.1.3.6 序列特征分析 | 第58页 |
| 4.2 实验结果 | 第58-65页 |
| 4.2.1 缢蛏FOXO基因多态性分析及与生长性状相关SNP位点筛选 | 第58-62页 |
| 4.2.2 缢蛏FOXO基因图谱定位 | 第62-63页 |
| 4.2.3 缢蛏FOXO基因时空表达特征分析 | 第63-65页 |
| 4.3 讨论 | 第65-69页 |
| 第五章 缢蛏IGF2BP蛋白的互作蛋白初步筛选 | 第69-76页 |
| 5.1 材料与方法 | 第69-71页 |
| 5.1.1 材料 | 第69页 |
| 5.1.2 仪器与试剂 | 第69页 |
| 5.1.3 实验方法 | 第69-71页 |
| 5.1.3.1 原核表达载体构建 | 第69-70页 |
| 5.1.3.2 原核表达及蛋白纯化 | 第70页 |
| 5.1.3.3 重组蛋白活性检测及互作蛋白初步筛选 | 第70-71页 |
| 5.2 实验结果 | 第71-72页 |
| 5.2.1 缢蛏IGF2BP原核表达及蛋白纯化 | 第71页 |
| 5.2.2 缢蛏IGF2BP互作蛋白分析 | 第71-72页 |
| 5.3 讨论 | 第72-76页 |
| 第六章 缢蛏类胰岛素生长因子系统相关miRNA初步筛选 | 第76-90页 |
| 6.1 材料与方法 | 第76-78页 |
| 6.1.1 材料 | 第76-77页 |
| 6.1.2 仪器与试剂 | 第77页 |
| 6.1.3 实验方法 | 第77-78页 |
| 6.1.3.1 总RNA提取及miRNA分离 | 第77页 |
| 6.1.3.2 miRNA组测序库构建 | 第77页 |
| 6.1.3.3 数据分析及靶基因预测 | 第77-78页 |
| 6.2 实验结果 | 第78-80页 |
| 6.2.1 缢蛏发育miRNA组测序分析及靶基因预测 | 第78-80页 |
| 6.2.2 ILP信号通路相关miRNA筛选与初步分析 | 第80页 |
| 6.3 讨论 | 第80-90页 |
| 小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 附录Ⅰ 博士期间学术成果 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 附表1 三门缢蛏群体生长性状数据 | 第103-105页 |
