| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 1 生长激素受体GHR基因的研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1 GHR基因的发现 | 第13页 |
| 1.2 GHR基因的结构 | 第13页 |
| 1.3 GHR基因mRNA表达水平的研究 | 第13-14页 |
| 1.4 GHR基因的信号传导途径 | 第14-18页 |
| 1.4.1 JAK-STAT信号通路 | 第14-15页 |
| 1.4.2 JAK-STAT信号途径的调控 | 第15-18页 |
| 1.4.2.1 JAK2基因 | 第17页 |
| 1.4.2.2 STAT3基因 | 第17-18页 |
| 2 基因编辑技术研究进展 | 第18-21页 |
| 2.1 锌指核酸酶基因打靶技术 | 第18-21页 |
| 2.1.1 基本技术原理 | 第18-19页 |
| 2.1.2 锌指核酸酶技术在动物转基因中的应用 | 第19页 |
| 2.1.3 锌指核酸酶技术在猪转基因中的应用 | 第19-21页 |
| 3 研究目的及意义 | 第21-22页 |
| 第二章 F3代GHR基因编辑猪(GHR(+/-))的鉴定及生长指标的测定 | 第22-34页 |
| 1 材料与方法 | 第22-25页 |
| 1.1 试验材料 | 第22页 |
| 1.1.1 试验动物 | 第22页 |
| 1.1.2 试验试剂与仪器 | 第22页 |
| 1.2 试验方法 | 第22-25页 |
| 1.2.1 试验猪耳组织的采集 | 第22页 |
| 1.2.2 基因组DNA的提取 | 第22-23页 |
| 1.2.3 DNA浓度和纯度检测 | 第23-24页 |
| 1.2.4 GHR基因的克隆及检测 | 第24页 |
| 1.2.5 F3代GHR基因敲猪纯合子阳性猪的筛选 | 第24页 |
| 1.2.6 繁殖性能及生长指标的测定 | 第24-25页 |
| 1.2.7 数据统计与分析 | 第25页 |
| 2 结果与分析 | 第25-32页 |
| 2.1 基因组DNA提取结果 | 第25页 |
| 2.2 GHR突变基因PCR的扩增结果 | 第25-26页 |
| 2.3 F3代GHR基因编辑猪(GHR(+/-))的鉴定 | 第26-27页 |
| 2.4 F3代GHR基因编辑猪的繁殖性能测定结果分析 | 第27-28页 |
| 2.5 F3代GHR基因编辑猪的生长发育指标测定 | 第28-31页 |
| 2.6 不同世代GHR基因编辑猪杂合阳性猪的生长指标分析 | 第31-32页 |
| 3 讨论 | 第32-33页 |
| 4 小节 | 第33-34页 |
| 第三章 GHR、JAK2、STAT3基因在从江香猪和GHR基因编辑猪不同组织的表达分析 | 第34-45页 |
| 1 材料与方法 | 第34-38页 |
| 1.1 试验材料 | 第34-36页 |
| 1.1.1 试验样品 | 第34-35页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 1.1.3 试验仪器设备 | 第35页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第35-36页 |
| 1.2 试验方法 | 第36-38页 |
| 1.2.1 总RNA的提取及检测 | 第36-37页 |
| 1.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第37页 |
| 1.2.3 引物的选取与设计 | 第37页 |
| 1.2.4 GHR、JAK2、STAT3基因克隆 | 第37-38页 |
| 1.2.5 qRT-PCR反应分析 | 第38页 |
| 1.2.6 数据的统计分析 | 第38页 |
| 2 结果与分析 | 第38-43页 |
| 2.1 总RNA的纯度检测 | 第38页 |
| 2.2 GHR、JAK2、STAT3基因克隆 | 第38-39页 |
| 2.3 实时荧光定量PCR产物的特异性分析 | 第39-41页 |
| 2.4 GHR、JAK2、STAT3基因在不同品种及组织间的表达差异 | 第41-43页 |
| 2.5 GHR基因在同一组织不同品种的表达差异 | 第43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 小节 | 第44-45页 |
| 第四章 GHR基因真核表达载体的构建及生物信息学分析 | 第45-62页 |
| 1 材料与方法 | 第45-53页 |
| 1.1 试验材料 | 第45-47页 |
| 1.1.1 试验样品 | 第45页 |
| 1.1.2 试验试剂 | 第45页 |
| 1.1.3 试验仪器 | 第45-46页 |
| 1.1.4 常用试剂的配制 | 第46-47页 |
| 1.2 试验方法 | 第47-48页 |
| 1.2.1 总DNA的提取 | 第47页 |
| 1.2.2 总RNA的提取 | 第47-48页 |
| 1.2.3 逆转录 | 第48页 |
| 1.3 GHR基因CDS区的克隆 | 第48-53页 |
| 1.3.1 GHR基因CDS区的引物设计 | 第48-49页 |
| 1.3.2 GHR基因CDS区的扩增 | 第49页 |
| 1.3.3 GHR基因PCR产物的胶回收 | 第49-50页 |
| 1.3.4 DH5α感受态细胞的制备 | 第50-51页 |
| 1.3.5 pMD-18T-GHR重组质粒的构建 | 第51页 |
| 1.3.6 重组质粒菌液PCR鉴定 | 第51页 |
| 1.3.7 重组质粒的提取 | 第51-52页 |
| 1.3.8 重组质粒和pEGFP-N3空载体的双酶切 | 第52-53页 |
| 1.3.9 pEGFP-N3-GHR真核表达载体的构建和鉴定 | 第53页 |
| 1.3.10 重组质粒pEGFP-N3-GHR的菌液保存 | 第53页 |
| 1.3.11 GHR基因CDS区的生物信息学分析 | 第53页 |
| 2 结果与分析 | 第53-61页 |
| 2.1 总RNA的提取和cDNA的合成 | 第53-54页 |
| 2.2 GHR基因CDS区的扩增结果 | 第54-55页 |
| 2.3 目的基因CDS区胶回收的结果 | 第55页 |
| 2.4 pMD-18T-GHR重组载体的菌液PCR鉴定 | 第55-56页 |
| 2.5 pMD-18T-GHR重组质粒的提取和鉴定 | 第56页 |
| 2.6 重组质粒的双酶切和pEGFP-N3-GHR真核表达载体的鉴定 | 第56-58页 |
| 2.7 GHR基因编辑猪CDS区的生物信息学分析 | 第58-61页 |
| 2.7.1 GHR基因氨基酸序列分析 | 第58-59页 |
| 2.7.2 GHR基因突变氨基酸结构及疏水性分析 | 第59-60页 |
| 2.7.3 GHR基因突变氨基酸跨膜结构分析 | 第60-61页 |
| 3 讨论 | 第61页 |
| 3.1 真核表达载体的选择 | 第61页 |
| 3.2 GHR基因突变对猪生长发育的影响 | 第61页 |
| 4 小节 | 第61-62页 |
| 第五章 结论与展望 | 第62-63页 |
| 1 结论 | 第62页 |
| 2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录 | 第69-72页 |
| 附录Ⅰ：硕士期间参与的课题及发表论文 | 第69-70页 |
| 附录Ⅱ：研究生期间试验和实践图片 | 第70-72页 |
