| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 符号与缩略语说明 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-25页 |
| 1.1 古细菌概述 | 第10-13页 |
| 1.2 硫化叶菌概述 | 第13-16页 |
| 1.2.1 硫化叶菌的形态学特征 | 第13页 |
| 1.2.2 硫化叶菌的代谢 | 第13-15页 |
| 1.2.3 硫化叶菌的DNA复制、转录和翻译 | 第15-16页 |
| 1.3 冰岛硫化叶菌的分类和性质 | 第16-18页 |
| 1.4 CRISPR-CAS系统 | 第18-22页 |
| 1.4.1 基因编辑技术和CRISPR-Cas系统 | 第18-19页 |
| 1.4.2 微生物的获得性免疫系统 | 第19-21页 |
| 1.4.3 细菌CRISPR系统的分类 | 第21-22页 |
| 1.5 CMR复合物 | 第22-23页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-53页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第25页 |
| 2.2 培养基的配方和培养条件 | 第25-28页 |
| 2.2.1 培养基母液的配制 | 第25-27页 |
| 2.2.2 液体培养基 | 第27页 |
| 2.2.3 固体培养基 | 第27-28页 |
| 2.2.4 冰岛硫化叶菌的培养条件 | 第28页 |
| 2.2.5 大肠杆菌的培养条件 | 第28页 |
| 2.3 试剂和仪器 | 第28-31页 |
| 2.3.1 工具酶 | 第28-29页 |
| 2.3.2 化学试剂和分子生物学试剂 | 第29页 |
| 2.3.3 试剂盒和公司服务 | 第29页 |
| 2.3.4 缓冲溶液的配制 | 第29-30页 |
| 2.3.5 实验涉及的仪器设备 | 第30-31页 |
| 2.4 分子克隆实验设计 | 第31-34页 |
| 2.5 分子克隆实验方法 | 第34-41页 |
| 2.5.1 冰岛硫化叶菌基因组的提取 | 第34-35页 |
| 2.5.2 大肠杆菌和硫化叶菌质粒提取 | 第35-36页 |
| 2.5.3 琼脂糖凝胶电泳实验 | 第36-37页 |
| 2.5.4 DNA的琼脂糖凝胶回收 | 第37-38页 |
| 2.5.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第38-39页 |
| 2.5.6 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第39页 |
| 2.5.7 硫化叶菌感受态细胞的制备、电转化和筛选 | 第39-41页 |
| 2.6 硫化叶菌细菌的大量培养 | 第41-46页 |
| 2.6.1 仪器介绍 | 第41-43页 |
| 2.6.2 硫化叶菌的发酵培养操作 | 第43-44页 |
| 2.6.3 发酵条件的调试 | 第44-45页 |
| 2.6.4 冰岛硫化叶菌表达菌株的生长曲线 | 第45-46页 |
| 2.7 蛋白实验方法 | 第46-53页 |
| 2.7.1 冰岛硫化叶菌细胞破碎 | 第46-47页 |
| 2.7.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第47-50页 |
| 2.7.3 蛋白质免疫印迹实验 | 第50-53页 |
| 3 结果与讨论 | 第53-64页 |
| 3.1 分子克隆实验结果 | 第53-59页 |
| 3.1.1 PCR实验和目的基因回收 | 第53-55页 |
| 3.1.2 酶切实验和连接反应 | 第55-58页 |
| 3.1.3 冰岛硫化叶菌的转化和筛选 | 第58-59页 |
| 3.2 蛋白的表达纯化 | 第59-64页 |
| 3.2.1 Cmr蛋白的表达 | 第59-60页 |
| 3.2.2 Cmr复合物的纯化 | 第60-64页 |
| 4 总结和展望 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-69页 |