| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语索引 | 第17-18页 |
| 第一章 引言 | 第18-25页 |
| 1.1 人星状病毒 | 第18-20页 |
| 1.1.1 人星状病毒基因组 | 第18-19页 |
| 1.1.2 人星状病毒感染及检测方法 | 第19-20页 |
| 1.2 酵母双杂交系统 | 第20-22页 |
| 1.2.1 酵母双杂交技术原理 | 第20-21页 |
| 1.2.2 酵母双杂交载体系统 | 第21页 |
| 1.2.3 酵母双杂交系统优缺点 | 第21-22页 |
| 1.3 多克隆抗体 | 第22-23页 |
| 1.4 本文研究目的及意义 | 第23-25页 |
| 第二章 宿主细胞与nsP1a/3互作蛋白的酵母双杂交筛选 | 第25-49页 |
| 2.1 材料和方法 | 第25-37页 |
| 2.1.1 材料 | 第25-28页 |
| 2.1.2 方法 | 第28-37页 |
| 2.2 结果 | 第37-46页 |
| 2.2.1 酵母生长特点研究 | 第37-38页 |
| 2.2.2 蜗牛酶消化酵母细胞壁最佳条件摸索 | 第38页 |
| 2.2.3 PCR扩增nsP1a/3基因序列 | 第38-39页 |
| 2.2.4 诱饵载体pGBKT7酶切位点的改造 | 第39页 |
| 2.2.5 重组诱饵载体nsP1a/3-pGBST7构建 | 第39-40页 |
| 2.2.6 PCR快速筛选诱饵酵母阳性克隆 | 第40-41页 |
| 2.2.7 诱饵酵母转化子特性鉴定 | 第41-42页 |
| 2.2.8 文库筛选 | 第42-43页 |
| 2.2.9 二倍体接合子质粒分析 | 第43-44页 |
| 2.2.10 回复杂交实验验证阳性克隆 | 第44页 |
| 2.2.11 文库基因序列分析 | 第44-46页 |
| 2.3 讨论 | 第46-48页 |
| 2.3.1 酵母细胞毒性及报告基因自激活检测的意义 | 第46页 |
| 2.3.2 文库简介 | 第46-47页 |
| 2.3.3 筛选的靶蛋白功能初步分析 | 第47-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 动物细胞验证nsP1a/3与靶蛋白相互作用体系构建 | 第49-63页 |
| 3.1 材料和方法 | 第49-57页 |
| 3.1.1 材料 | 第49-53页 |
| 3.1.2 方法 | 第53-57页 |
| 3.2 结果 | 第57-62页 |
| 3.2.1 引物设计 | 第58-59页 |
| 3.2.2 nsP1a/3-Flag、TMEM120A-HA、ZBRK1基因PCR扩增 | 第59-60页 |
| 3.2.3 三个真核表达载体酶切鉴定 | 第60-61页 |
| 3.2.4 WB检测三个重组载体表达 | 第61-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62页 |
| 3.3.1 细胞转染 | 第62页 |
| 3.4 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 nsP1a/3、TMEM120A、ZBRK1蛋白多克隆抗体制备 | 第63-83页 |
| 4.1 材料和方法 | 第63-71页 |
| 4.1.1 材料 | 第63-67页 |
| 4.1.2 方法 | 第67-71页 |
| 4.2 结果 | 第71-80页 |
| 4.2.1 三个原核表达载体构建及酶切鉴定 | 第71-73页 |
| 4.2.2 最优表达时间的确定 | 第73-74页 |
| 4.2.3 温度对蛋白表达定位的影响 | 第74-75页 |
| 4.2.4 目的蛋白纯化 | 第75-76页 |
| 4.2.5 蛋白浓度测定 | 第76-77页 |
| 4.2.6 重组蛋白Westernbolt鉴定 | 第77页 |
| 4.2.7 多克隆抗体鉴定 | 第77-80页 |
| 4.3 讨论 | 第80-81页 |
| 4.3.1 原核表达载体的选择 | 第80-81页 |
| 4.3.2 重组蛋白的表达形式 | 第81页 |
| 4.3.3 目的蛋白纯化 | 第81页 |
| 4.3.4 多克隆抗体制备 | 第81页 |
| 4.4 小结 | 第81-83页 |
| 第五章 全文总结 | 第83-84页 |
| 第六章 展望 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-91页 |
| 附录 A | 第91页 |
| 一、攻读硕士期间发表论文 | 第91页 |
| 二、攻读硕士期间参加项目情况 | 第91页 |
