| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 1 绪论 | 第18-39页 |
| 1.1 HD-domain超家族5'-核苷酸酶 | 第19-26页 |
| 1.1.1 5'-核苷酸酶概述 | 第19-20页 |
| 1.1.2 HD-domain超家族蛋白概述 | 第20-24页 |
| 1.1.3 5'-核苷酸酶的催化活性机理 | 第24-25页 |
| 1.1.4 磷酸水解酶筛选通用实验方法 | 第25-26页 |
| 1.2 毒素-抗毒素系统 | 第26-37页 |
| 1.2.1 TA系统的类型 | 第26-29页 |
| 1.2.2 TA系统中毒素的靶标 | 第29-31页 |
| 1.2.3 大肠杆菌中的TA系统 | 第31-34页 |
| 1.2.4 TA系统的生理学功能 | 第34页 |
| 1.2.5 多水平自动调控 | 第34-35页 |
| 1.2.6 TA系统的应用 | 第35-37页 |
| 1.3 本论文主要研究思路与内容 | 第37-39页 |
| 2 酵母核苷酸酶YGK1结构与功能研究 | 第39-71页 |
| 2.1 引言 | 第39-41页 |
| 2.2 实验部分 | 第41-55页 |
| 2.2.1 YGK1基因克隆与质粒构建 | 第41-42页 |
| 2.2.2 YGK1蛋白的表达与纯化 | 第42-45页 |
| 2.2.3 YGK1突变体质粒构建 | 第45-46页 |
| 2.2.4 YGK1突变体蛋白的表达与纯化 | 第46页 |
| 2.2.5 Se-Met YGK1蛋白的表达和纯化 | 第46-47页 |
| 2.2.6 酵母YB92蛋白基因克隆与质粒构建 | 第47-48页 |
| 2.2.7 YB92蛋白的表达与纯化 | 第48页 |
| 2.2.8 磷酸酶活性实验 | 第48-50页 |
| 2.2.9 YGK1系统蛋白晶体筛选与优化 | 第50-52页 |
| 2.2.10 YGK1系统蛋白晶体数据收集与结构解析 | 第52-54页 |
| 2.2.11 分子筛层析Superdex 200 10/300测定YGK1和YB92的分子量 | 第54-55页 |
| 2.2.12 DMP化学交联实验 | 第55页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第55-70页 |
| 2.3.1 YGK1和YB92核苷酸酶活性分析 | 第55-63页 |
| 2.3.2 YGK1蛋白的晶体结构 | 第63-65页 |
| 2.3.3 YGK1和YB92蛋白溶液中的状态分析 | 第65-69页 |
| 2.3.4 同源蛋白序列比对分析 | 第69-70页 |
| 2.4 结论 | 第70-71页 |
| 3 大肠杆菌毒素-抗毒素系统HicAB的表达、纯化与结晶 | 第71-85页 |
| 3.1 引言 | 第71-72页 |
| 3.2 实验部分 | 第72-81页 |
| 3.2.1 HicAB基因克隆与质粒构建 | 第72-74页 |
| 3.2.2 HicAB蛋白的表达与纯化 | 第74-75页 |
| 3.2.3 HicA质粒构建 | 第75页 |
| 3.2.4 HicA蛋白的表达与纯化 | 第75-76页 |
| 3.2.5 HicAB~L(M8I)与HicAB~S质粒构建 | 第76-77页 |
| 3.2.6 HicAB~L(M8I)与HicAB~S蛋白的表达和纯化 | 第77页 |
| 3.2.7 Se-Met HicAB复合物蛋白的表达和纯化 | 第77页 |
| 3.2.8 HicAB系统蛋白晶体筛选与优化 | 第77-79页 |
| 3.2.9 HicAB~S系统蛋白晶体数据收集与结构解析 | 第79-80页 |
| 3.2.10 分子筛层析Superdex 75 10/300测定蛋白分子量 | 第80-81页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第81-84页 |
| 3.3.1 HicB基因序列起始密码子位置的确定 | 第81-82页 |
| 3.3.2 复合物WT-HicAB、HicAB~S、HicAB~L(M8I)和毒素HicA蛋白溶液中的状态分析 | 第82-83页 |
| 3.3.3 复合物HicAB蛋白的晶体结构预测 | 第83-84页 |
| 3.4 结论 | 第84-85页 |
| 4 大肠杆菌毒素-抗毒素系统HigBA结构与功能研究 | 第85-111页 |
| 4.1 引言 | 第85-86页 |
| 4.2 实验部分 | 第86-98页 |
| 4.2.1 higBA基因克隆与质粒构建 | 第86-87页 |
| 4.2.2 HigBA蛋白的表达与纯化 | 第87-88页 |
| 4.2.3 HigA和HigB(H88A)质粒构建 | 第88页 |
| 4.2.4 HigA和HigB(H88A)蛋白的表达与纯化 | 第88-90页 |
| 4.2.5 HigBA_(△4-18)和HigBA_(△91-138)质粒构建 | 第90页 |
| 4.2.6 HigBA_(△4-18)和HigBA_(△91-138)蛋白的表达与纯化 | 第90-91页 |
| 4.2.7 Se-Met HigBA复合物蛋白的表达和纯化 | 第91页 |
| 4.2.8 HigBA系统蛋白晶体筛选与优化 | 第91-93页 |
| 4.2.9 HigBA系统蛋白晶体数据收集与结构解析 | 第93-95页 |
| 4.2.10 凝胶阻滞电泳迁移实验(EMSA) | 第95-96页 |
| 4.2.11 分子筛层析Superdex 200 10/300测定蛋白分子量 | 第96-97页 |
| 4.2.12 ITC滴定测定HigBA系统的热力学参数 | 第97-98页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第98-109页 |
| 4.3.1 复合物HigBA和截短体HigBA_(△4-18)蛋白溶液状态分析 | 第98-99页 |
| 4.3.2 复合物HigBA蛋白的晶体结构 | 第99-102页 |
| 4.3.3 EMSA实验分析HigBA系统自身转录调控 | 第102-107页 |
| 4.3.4 HigBA系统的热力学参数分析 | 第107-109页 |
| 4.4 结论 | 第109-111页 |
| 5 结论与展望 | 第111-114页 |
| 5.1 结论 | 第111-112页 |
| 5.2 创新点 | 第112页 |
| 5.3 展望 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-123页 |
| 附录 | 第123-139页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第139-140页 |
| 致谢 | 第140-141页 |
| 作者简介 | 第141页 |
