| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 3-HP研究进展 | 第17-21页 |
| 1.1.1 3-HP研究背景 | 第17-18页 |
| 1.1.2 代谢通路与调控 | 第18-20页 |
| 1.1.3 发酵调控 | 第20-21页 |
| 1.1.4 宿主菌的选择 | 第21页 |
| 1.2 dha调节子 | 第21-25页 |
| 1.2.1 dha调节子简介 | 第21-22页 |
| 1.2.2 不同微生物中dha调节子的分布 | 第22-23页 |
| 1.2.3 各菌体间dha调节子的序列分析 | 第23-24页 |
| 1.2.4 各菌体间dha调节子的功能 | 第24-25页 |
| 1.3 醛脱氢酶 | 第25-28页 |
| 1.3.1 醛脱氢酶结构简介 | 第25-26页 |
| 1.3.2 醛脱氢酶的作用机理 | 第26-27页 |
| 1.3.3 醛脱氢酶在3-HP生产中的重要作用 | 第27-28页 |
| 1.4 DhaT简介 | 第28-30页 |
| 1.4.1 DhaT结构 | 第28-30页 |
| 1.4.2 DhaT的作用 | 第30页 |
| 1.5 本课题的研究意义 | 第30-33页 |
| 第二章 甘油脱氢酶(DhaD)的作用-dha调节子的平衡刚性 | 第33-47页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-35页 |
| 2.2.1 菌种和质粒 | 第34页 |
| 2.2.2 培养基 | 第34页 |
| 2.2.3 试剂和仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 工程菌K.p(pET-PK-dhaD)的构建 | 第35-39页 |
| 2.3.1 聚合酶链式反应扩增dhaD基因 | 第35-36页 |
| 2.3.2 质粒pET-PK-dhaD的构建 | 第36-37页 |
| 2.3.3 质粒pET-PK-dhaD的筛选鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.4 质粒pET-PK-dhaD电转至K.pneumoniae DSM2026 | 第38页 |
| 2.3.5 重组菌K.p(pET-PK-dhaD)的筛选与鉴定 | 第38页 |
| 2.3.6 重组菌的发酵培养 | 第38-39页 |
| 2.3.7 发酵液分析方法 | 第39页 |
| 2.3.8 酶活测定 | 第39页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第39-45页 |
| 2.4.1 目的基因dhaD的扩增 | 第39-40页 |
| 2.4.2 重组质粒pET-PK-dhaD的转化 | 第40页 |
| 2.4.3 重组质粒电转化及阳性克隆的筛选 | 第40-41页 |
| 2.4.4 重组菌发酵 | 第41-45页 |
| 2.4.5 酶活测定 | 第45页 |
| 2.5 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 醛脱氢酶(DhaS)的作用---高效性和强专一性 | 第47-63页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.2.1 菌种和质粒 | 第47-48页 |
| 3.2.2 培养基 | 第48页 |
| 3.2.3 试剂和仪器 | 第48页 |
| 3.3 工程菌K.p(pET-PK-dhaS)的构建 | 第48-53页 |
| 3.3.1 聚合酶链式反应扩增dhaS基因 | 第48-49页 |
| 3.3.2 质粒pET-PK-dhaS的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.3 质粒pET-PK-dhaS的筛选鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3.4 质粒pET-PK-dhaS电转至K.pneumoniae DSM2026 | 第51-52页 |
| 3.3.5 重组菌K.p(pET-PK-dhaS)的筛选与鉴定 | 第52页 |
| 3.3.6 重组菌的发酵培养 | 第52页 |
| 3.3.7 发酵液分析方法 | 第52-53页 |
| 3.3.8 酶活测定 | 第53页 |
| 3.3.9 DhaS模型预测 | 第53页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第53-61页 |
| 3.4.1 目的基因dhaS扩增 | 第53-54页 |
| 3.4.2 重组质粒pET-PK-dhaS的转化 | 第54页 |
| 3.4.3 重组质粒电转化及阳性克隆的筛选 | 第54-55页 |
| 3.4.4 重组菌发酵 | 第55-58页 |
| 3.4.5 上罐发酵 | 第58-59页 |
| 3.4.6 酶活测定 | 第59-60页 |
| 3.4.7 序列分析和同源建模 | 第60-61页 |
| 3.5 本章小结 | 第61-63页 |
| 第四章 1,3-丙二醇氧化还原酶(DhaT)在代谢网络中的重要作用 | 第63-75页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.2.1 菌种和质粒 | 第63-64页 |
| 4.2.2 培养基 | 第64页 |
| 4.2.3 试剂和仪器 | 第64页 |
| 4.3 工程菌K.p(pET-PK-dhaT)的构建 | 第64-68页 |
| 4.3.1 聚合酶链式反应扩增dhaT基因 | 第64-65页 |
| 4.3.2 质粒pET-PK-dhaT的构建 | 第65-66页 |
| 4.3.3 质粒pET-PK-dhaT的筛选鉴定 | 第66-67页 |
| 4.3.4 质粒pET-PK-dhaT电转至K.pneumoniae DSM2026 | 第67-68页 |
| 4.3.5 重组菌K.p(pET-PK-dhaT)的筛选与鉴定 | 第68页 |
| 4.3.6 重组菌的发酵培养 | 第68页 |
| 4.3.7 发酵液分析方法 | 第68页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第68-74页 |
| 4.4.1 目的基因dhaT的扩增 | 第68-69页 |
| 4.4.2 重组质粒pET-PK-dhaT的转化 | 第69页 |
| 4.4.3 重组质粒电转化及阳性克隆的筛选 | 第69-70页 |
| 4.4.4 重组菌发酵 | 第70-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-75页 |
| 第五章 总结与建议 | 第75-77页 |
| 5.1 结论 | 第75-76页 |
| 5.2 创新点 | 第76页 |
| 5.3 问题与建议 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录1 代谢图 | 第83-89页 |
| 附录2 试剂 | 第89-91页 |
| 附录3 仪器设备 | 第91-93页 |
| 致谢 | 第93-95页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第95-97页 |
| 作者和导师简介 | 第97-98页 |
| 专业学位硕士研究生学位论文答辩委员会决议书 | 第98-99页 |
