| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 肠球菌的毒力因子 | 第11-21页 |
| 1.1.1 心内膜炎抗原(EfaA) | 第11-13页 |
| 1.1.2 聚集物质(AS) | 第13页 |
| 1.1.3 明胶酶E(Gelatinase,GelE) | 第13-18页 |
| 1.1.3.1 gelE与fsr生物感应系统之间的关系 | 第15页 |
| 1.1.3.2 gelE、fsr群体感应系统与生物膜(Biofilm)形成之间的关系 | 第15-18页 |
| 1.1.4 胶原蛋白黏附素(ACE,ACM) | 第18-19页 |
| 1.1.4.1 Ace与fsr生物感应系统之间的关系 | 第18-19页 |
| 1.1.5 表面蛋白(esp) | 第19-20页 |
| 1.1.6 溶血素(cytolysin,cyl) | 第20-21页 |
| 1.2 肠球菌研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 猪源粪肠球菌毒力基因的原核表达和纯化及序列的比对分析 | 第22-38页 |
| 2.1 材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 主要的仪器设备和试剂 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基及试剂的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.3 菌种 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 毒力基因的检测 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 DNA模板的制备 | 第23页 |
| 2.2.1.3 引物的设计 | 第23-24页 |
| 2.2.1.4 PCR扩增毒力基因 | 第24页 |
| 2.2.2 PCR产物的回收 | 第24页 |
| 2.2.3 重组质粒的构建 | 第24-29页 |
| 2.2.3.1 Pet28a(+)空质粒的制备 | 第24页 |
| 2.2.3.2 质粒酶切 | 第24-25页 |
| 2.2.3.3 产物酶切 | 第25页 |
| 2.2.3.4 产物的连接 | 第25页 |
| 2.2.3.5 CaCl2制备感受态细胞以及转化 | 第25-26页 |
| 2.2.3.6 阳性转化子的挑选鉴定 | 第26-27页 |
| 2.2.3.7 重组蛋白的序列结果分析 | 第27页 |
| 2.2.3.8 重组蛋白的诱导表达及SDS-PAGE电泳 | 第27-28页 |
| 2.2.3.9 重组蛋白纯化 | 第28-29页 |
| 2.2.3.10 重组蛋白的Westernblot | 第29页 |
| 2.2.3.11 明胶液化实验 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-35页 |
| 2.3.1 PCR扩增几个目的基因的结果 | 第29-30页 |
| 2.3.2 阳性转化子的鉴定结果 | 第30页 |
| 2.3.3 重组质粒的序列分析 | 第30-33页 |
| 2.3.3.1 重组质粒pet28a-esp | 第30-31页 |
| 2.3.3.2 重组质粒 pet28a-gelE | 第31页 |
| 2.3.3.3 重组质粒pet28a–fsrA | 第31-32页 |
| 2.3.3.4 重组质粒pet28a–fsrB | 第32页 |
| 2.3.3.5 重组质粒pet28a–fsrC | 第32页 |
| 2.3.3.6 重组质粒pet28a–sprE | 第32-33页 |
| 2.3.4 重组蛋白SDS-PAGE电泳 | 第33-34页 |
| 2.3.5 重组蛋白的纯化结果 | 第34页 |
| 2.3.6 重组蛋白的westernblot结果 | 第34-35页 |
| 2.3.7 明胶液化实验 | 第35页 |
| 2.4 讨论与分析 | 第35-37页 |
| 2.4.1 几个重组蛋白的表达及纯化 | 第35-36页 |
| 2.4.2 几个重组蛋白的明胶液化实验 | 第36-37页 |
| 2.5 小结 | 第37-38页 |
| 第三章 猪源肠球菌五个毒力基因的检测 | 第38-51页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 试验菌株 | 第38-39页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-40页 |
| 3.2.1 PCR对毒力基因的检测 | 第39-40页 |
| 3.2.1.1 毒力基因的扩增引物 | 第39页 |
| 3.2.1.2 水煮法制备PCR的DNA模板 | 第39页 |
| 3.2.1.3 PCR扩增毒力基因 | 第39-40页 |
| 3.2.2 明胶溶解试验 | 第40页 |
| 3.3 结果 | 第40-47页 |
| 3.3.1 五种毒力基因的检测结果 | 第40-45页 |
| 3.3.1.1 健康猪源新鲜粪便中分离到的肠球菌毒力基因PCR检测结果 | 第40-42页 |
| 3.3.1.2 健康猪源肛门拭子中分离到的肠球菌毒力基因PCR检测结果 | 第42-43页 |
| 3.3.1.3 流行性腹泻(PED)猪源肛门拭子中分离到的肠球菌毒力基因PCR检测结果 | 第43-45页 |
| 3.3.2 明胶液化实验结果 | 第45-46页 |
| 3.3.2.1 健康猪源新鲜粪便中分离到的肠球菌明胶液化实验结果 | 第45-46页 |
| 3.3.2.2 健康猪源肛门拭子中分离到的肠球菌明胶液化实验结果 | 第46页 |
| 3.3.3 明胶液化实验结果与五种毒力基因检测结果的对比 | 第46-47页 |
| 3.3.3.1 健康猪源新鲜粪便中分离到的肠球菌明胶液化实验结果与五种毒力基因检测结果的对比 | 第46页 |
| 3.3.3.2 健康猪源肛门拭子中分离到的肠球菌明胶液化实验结果与五种毒力基因检测结果的对比 | 第46-47页 |
| 3.3.3.3 流行性腹泻(PED)病猪的肛门拭子中分离到的肠球菌明胶液化实验结果与五种毒力基因检测结果的对比 | 第47页 |
| 3.4 讨论与分析 | 第47-49页 |
| 3.4.1 肠球菌毒力基因的PCR检测 | 第47-48页 |
| 3.4.2 明胶液化实验与五个毒力基因的检测分析 | 第48-49页 |
| 3.5 小结 | 第49-51页 |
| 全文总结 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 个人简历 | 第61页 |
