前言 | 第4-6页 |
中文摘要 | 第6-9页 |
Abstract | 第9-12页 |
中英文缩略词对照表 | 第19-21页 |
第1章 绪论 | 第21-23页 |
第2章 文献综述 | 第23-41页 |
2.1 神经胶质瘤治疗概述 | 第23-26页 |
2.1.1 治疗方法总论 | 第23-24页 |
2.1.2 手术治疗 | 第24页 |
2.1.3 放射治疗 | 第24-25页 |
2.1.4 化学治疗 | 第25页 |
2.1.5 新型治疗 | 第25-26页 |
2.2 铁离子依赖的Ferroptosis死亡 | 第26-38页 |
2.2.1 研究近况 | 第27-34页 |
2.2.2 Ferroptosis与其他通路的关系 | 第34-36页 |
2.2.3 应用现状 | 第36-38页 |
2.2.4 小结 | 第38页 |
2.3 土槿皮乙酸 | 第38-41页 |
第3章 实验材料与方法 | 第41-69页 |
3.1 主要器材试剂与动物 | 第41-44页 |
3.1.1 主要实验器材 | 第41-42页 |
3.1.2 主要实验试剂 | 第42-43页 |
3.1.3 主要实验动物 | 第43-44页 |
3.2 细胞系及细胞培养 | 第44页 |
3.3 实验液体及药物配制方法 | 第44-48页 |
3.3.1 细胞培养液配制 | 第44页 |
3.3.2 PBS磷酸盐缓冲液配制 | 第44页 |
3.3.3 0.25%胰蛋白酶配制 | 第44页 |
3.3.4 MTT工作液配制 | 第44-45页 |
3.3.5 土槿皮乙酸PAB工作液配制 | 第45页 |
3.3.6 去铁胺DFO工作液配制 | 第45页 |
3.3.7 柠檬酸铁铵FAC工作液配制 | 第45页 |
3.3.8 铁调素-1 即Ferrostatin-1 工作液配制 | 第45-46页 |
3.3.9 维生素E即Vitamine E工作液配制 | 第46页 |
3.3.10 谷胱甘肽即GSH工作液配制 | 第46页 |
3.3.11 GKT137831工作液配制 | 第46-47页 |
3.3.12 Western Blotting相关试剂配制 | 第47-48页 |
3.4 细胞复苏、传代及冻存 | 第48-49页 |
3.4.1 细胞复苏 | 第48页 |
3.4.2 细胞传代 | 第48页 |
3.4.3 细胞冻存 | 第48-49页 |
3.5 实验技术 | 第49-69页 |
3.5.1 MTT法检测细胞增殖活性 | 第49-50页 |
3.5.2 LDH乳酸脱氢酶释放法检测细胞死亡 | 第50-51页 |
3.5.3 Western Blotting法检测细胞蛋白表达 | 第51-55页 |
3.5.4 二价铁离子检测 | 第55-56页 |
3.5.5 过氧化氢H2O2检测 | 第56-57页 |
3.5.6 超氧化物阴离子DHE检测 | 第57-58页 |
3.5.7 活性氧ROS检测 | 第58-59页 |
3.5.8 NAPDH氧化酶NOX检测 | 第59-60页 |
3.5.9 丙二醛MDA检测 | 第60-62页 |
3.5.10 总谷胱甘肽GSH检测 | 第62-63页 |
3.5.11 半胱氨酸Cysteine检测 | 第63-64页 |
3.5.12 线粒体膜电位JC-1 检测 | 第64-65页 |
3.5.13 si RNA干扰细胞蛋白表达 | 第65-66页 |
3.5.14 透射电镜观察细胞形态 | 第66-67页 |
3.5.15 裸鼠荷瘤及腹腔给药 | 第67-68页 |
3.5.16 统计学分析 | 第68-69页 |
第4章 实验结果 | 第69-103页 |
4.1 PAB抑制胶质瘤细胞增殖活性并能诱导其死亡 | 第69-71页 |
4.1.1 MTT法检测PAB时间梯度、浓度梯度对于胶质瘤细胞增殖活性影响 | 第70页 |
4.1.2 LDH法检测PAB浓度梯度对于胶质瘤细胞毒性作用 | 第70-71页 |
4.1.3 MTT法检测PAB浓度梯度作用 48h对于人肝正常细胞增殖活性影响 | 第71页 |
4.2 铁离子调控PAB诱导的胶质瘤细胞死亡 | 第71-77页 |
4.2.1 检测PAB高低浓度、长短时程作用胶质瘤细胞后Fe2+含量 | 第72-73页 |
4.2.2 检测DFO提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤细胞Fe2+含量 | 第73页 |
4.2.3 检测DFO提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤细胞的LDH | 第73-74页 |
4.2.4 检测FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤细胞的LDH | 第74页 |
4.2.5 Western Blotting法检测PAB时间梯度样品铁离子转运相关蛋白表达;DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h胶质瘤的铁离子转运相关蛋白表达 | 第74-75页 |
4.2.6 DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后光镜下观察胶质瘤细胞形态学特征 | 第75-76页 |
4.2.7 PAB处理胶质瘤细胞 24h后电镜下观察细胞形态学特征 | 第76页 |
4.2.8 PAB处理胶质瘤细胞 24h后JC-1 荧光染色观察线粒体形态学特征 | 第76-77页 |
4.2.9 PAB处理胶质瘤细胞 24h后JC-1 流式细胞术检测线粒体功能 | 第77页 |
4.3 铁离子参与PAB诱导的胶质瘤细胞脂质过氧化发生 | 第77-81页 |
4.3.1 荧光显微镜观察PAB作用 24h后胶质瘤细胞ROS产生 | 第78-79页 |
4.3.2 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程处理胶质瘤细胞ROS产生 | 第79页 |
4.3.3 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程处理胶质瘤细胞MDA产生 | 第79-80页 |
4.3.4 酶标仪检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤 24h后ROS与MDA变化 | 第80-81页 |
4.3.5 酶标仪检测Ferrostatin-1,Vitamin E,GSH提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的LDH | 第81页 |
4.4 铁离子调节PAB诱导的超氧化物阴离子与过氧化氢产生 | 第81-84页 |
4.4.1 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程处理胶质瘤细胞H2O2产生 | 第82页 |
4.4.2 荧光显微镜观察PAB作用 24h后胶质瘤细胞DHE产生 | 第82-83页 |
4.4.3 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程诱导胶质瘤细胞DHE产生 | 第83页 |
4.4.4 酶标仪检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤 24h后DHE与H2O2变化 | 第83-84页 |
4.5 铁离子促进PAB诱导产生的NOX4活化 | 第84-91页 |
4.5.1 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程诱导胶质瘤NOX变化 | 第85-86页 |
4.5.2 酶标仪检测DFO,FAC提前 1h预处理后PAB作用 24h后胶质瘤NOX变化 | 第86页 |
4.5.3 Western Blotting法检测PAB时间梯度下诱导胶质瘤NOX4表达 | 第86-87页 |
4.5.4 Western Blotting法检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB高低浓度下诱导胶质瘤NOX4表达 | 第87页 |
4.5.5 GKT137831提前预处理 1h,PAB检测NOX,DHE,H2O2以及MDA变化情况 | 第87页 |
4.5.6 光镜下观察GKT137831提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤 24h后的形态学特征 | 第87-88页 |
4.5.7 检测GKT137831提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的LDH与WB结果 | 第88-89页 |
4.5.8 使用si RNA沉默NOX4后PAB作用 24h的WB、LDH、H2O2以及MDA检测 | 第89-91页 |
4.6 铁离子促进PAB诱导的x CT下调,进而导致谷胱甘肽耗竭 | 第91-97页 |
4.6.1 Western Blotting检测PAB时间梯度下诱导胶质瘤GPX4表达量 | 第92页 |
4.6.2 使用si RNA沉默GPX4后检测PAB诱导的胶质瘤细胞WB与LDH变化 | 第92-93页 |
4.6.3 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程作用胶质瘤后谷胱甘肽含量 | 第93-94页 |
4.6.4 检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤谷胱甘肽含量 | 第94页 |
4.6.5 检测PAB高低浓度、长短时程作用胶质瘤后半胱氨酸含量.74 | 第94-95页 |
4.6.6 检测GSH提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤的MDA含量与LDH变化 | 第95页 |
4.6.7 检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的半胱氨酸含量 | 第95页 |
4.6.8 Western Blotting检测PAB时间梯度下诱导胶质瘤x CT、P53,P-P53表达量 | 第95-96页 |
4.6.9 Western Blotting检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的x CT、P53,P-P53表达量 | 第96-97页 |
4.7 体内实验中PAB抑制肿瘤组织生长,呈现剂量相关性 | 第97-101页 |
4.7.1 裸鼠荷瘤大体图片以及不同组内裸鼠肿瘤平均体积 | 第97-98页 |
4.7.2 检测不同组内裸鼠肿瘤的铁离子水平 | 第98-99页 |
4.7.3 Western Blotting法检测不同组内裸鼠肿瘤铁离子转运相关蛋白变化 | 第99页 |
4.7.4 检测不同组内裸鼠肿瘤的过氧化氢以及丙二醛水平 | 第99-100页 |
4.7.5 检测不同组内裸鼠肿瘤的谷胱甘肽以及半胱氨酸水平 | 第100-101页 |
4.8 土槿皮乙酸 PAB 诱发胶质瘤 Ferroptosis 的分子机制模式图 | 第101-103页 |
第5章 讨论 | 第103-107页 |
第6章 结论 | 第107-109页 |
参考文献 | 第109-129页 |
作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第129-131页 |
致谢 | 第131页 |