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NOX4激活与xCT抑制在土槿皮乙酸诱导神经胶质瘤Ferroptosis死亡中的作用及机制研究

前言第4-6页
中文摘要第6-9页
Abstract第9-12页
中英文缩略词对照表第19-21页
第1章 绪论第21-23页
第2章 文献综述第23-41页
    2.1 神经胶质瘤治疗概述第23-26页
        2.1.1 治疗方法总论第23-24页
        2.1.2 手术治疗第24页
        2.1.3 放射治疗第24-25页
        2.1.4 化学治疗第25页
        2.1.5 新型治疗第25-26页
    2.2 铁离子依赖的Ferroptosis死亡第26-38页
        2.2.1 研究近况第27-34页
        2.2.2 Ferroptosis与其他通路的关系第34-36页
        2.2.3 应用现状第36-38页
        2.2.4 小结第38页
    2.3 土槿皮乙酸第38-41页
第3章 实验材料与方法第41-69页
    3.1 主要器材试剂与动物第41-44页
        3.1.1 主要实验器材第41-42页
        3.1.2 主要实验试剂第42-43页
        3.1.3 主要实验动物第43-44页
    3.2 细胞系及细胞培养第44页
    3.3 实验液体及药物配制方法第44-48页
        3.3.1 细胞培养液配制第44页
        3.3.2 PBS磷酸盐缓冲液配制第44页
        3.3.3 0.25%胰蛋白酶配制第44页
        3.3.4 MTT工作液配制第44-45页
        3.3.5 土槿皮乙酸PAB工作液配制第45页
        3.3.6 去铁胺DFO工作液配制第45页
        3.3.7 柠檬酸铁铵FAC工作液配制第45页
        3.3.8 铁调素-1 即Ferrostatin-1 工作液配制第45-46页
        3.3.9 维生素E即Vitamine E工作液配制第46页
        3.3.10 谷胱甘肽即GSH工作液配制第46页
        3.3.11 GKT137831工作液配制第46-47页
        3.3.12 Western Blotting相关试剂配制第47-48页
    3.4 细胞复苏、传代及冻存第48-49页
        3.4.1 细胞复苏第48页
        3.4.2 细胞传代第48页
        3.4.3 细胞冻存第48-49页
    3.5 实验技术第49-69页
        3.5.1 MTT法检测细胞增殖活性第49-50页
        3.5.2 LDH乳酸脱氢酶释放法检测细胞死亡第50-51页
        3.5.3 Western Blotting法检测细胞蛋白表达第51-55页
        3.5.4 二价铁离子检测第55-56页
        3.5.5 过氧化氢H2O2检测第56-57页
        3.5.6 超氧化物阴离子DHE检测第57-58页
        3.5.7 活性氧ROS检测第58-59页
        3.5.8 NAPDH氧化酶NOX检测第59-60页
        3.5.9 丙二醛MDA检测第60-62页
        3.5.10 总谷胱甘肽GSH检测第62-63页
        3.5.11 半胱氨酸Cysteine检测第63-64页
        3.5.12 线粒体膜电位JC-1 检测第64-65页
        3.5.13 si RNA干扰细胞蛋白表达第65-66页
        3.5.14 透射电镜观察细胞形态第66-67页
        3.5.15 裸鼠荷瘤及腹腔给药第67-68页
        3.5.16 统计学分析第68-69页
第4章 实验结果第69-103页
    4.1 PAB抑制胶质瘤细胞增殖活性并能诱导其死亡第69-71页
        4.1.1 MTT法检测PAB时间梯度、浓度梯度对于胶质瘤细胞增殖活性影响第70页
        4.1.2 LDH法检测PAB浓度梯度对于胶质瘤细胞毒性作用第70-71页
        4.1.3 MTT法检测PAB浓度梯度作用 48h对于人肝正常细胞增殖活性影响第71页
    4.2 铁离子调控PAB诱导的胶质瘤细胞死亡第71-77页
        4.2.1 检测PAB高低浓度、长短时程作用胶质瘤细胞后Fe2+含量第72-73页
        4.2.2 检测DFO提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤细胞Fe2+含量第73页
        4.2.3 检测DFO提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤细胞的LDH第73-74页
        4.2.4 检测FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤细胞的LDH第74页
        4.2.5 Western Blotting法检测PAB时间梯度样品铁离子转运相关蛋白表达;DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h胶质瘤的铁离子转运相关蛋白表达第74-75页
        4.2.6 DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后光镜下观察胶质瘤细胞形态学特征第75-76页
        4.2.7 PAB处理胶质瘤细胞 24h后电镜下观察细胞形态学特征第76页
        4.2.8 PAB处理胶质瘤细胞 24h后JC-1 荧光染色观察线粒体形态学特征第76-77页
        4.2.9 PAB处理胶质瘤细胞 24h后JC-1 流式细胞术检测线粒体功能第77页
    4.3 铁离子参与PAB诱导的胶质瘤细胞脂质过氧化发生第77-81页
        4.3.1 荧光显微镜观察PAB作用 24h后胶质瘤细胞ROS产生第78-79页
        4.3.2 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程处理胶质瘤细胞ROS产生第79页
        4.3.3 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程处理胶质瘤细胞MDA产生第79-80页
        4.3.4 酶标仪检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤 24h后ROS与MDA变化第80-81页
        4.3.5 酶标仪检测Ferrostatin-1,Vitamin E,GSH提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的LDH第81页
    4.4 铁离子调节PAB诱导的超氧化物阴离子与过氧化氢产生第81-84页
        4.4.1 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程处理胶质瘤细胞H2O2产生第82页
        4.4.2 荧光显微镜观察PAB作用 24h后胶质瘤细胞DHE产生第82-83页
        4.4.3 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程诱导胶质瘤细胞DHE产生第83页
        4.4.4 酶标仪检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤 24h后DHE与H2O2变化第83-84页
    4.5 铁离子促进PAB诱导产生的NOX4活化第84-91页
        4.5.1 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程诱导胶质瘤NOX变化第85-86页
        4.5.2 酶标仪检测DFO,FAC提前 1h预处理后PAB作用 24h后胶质瘤NOX变化第86页
        4.5.3 Western Blotting法检测PAB时间梯度下诱导胶质瘤NOX4表达第86-87页
        4.5.4 Western Blotting法检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB高低浓度下诱导胶质瘤NOX4表达第87页
        4.5.5 GKT137831提前预处理 1h,PAB检测NOX,DHE,H2O2以及MDA变化情况第87页
        4.5.6 光镜下观察GKT137831提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤 24h后的形态学特征第87-88页
        4.5.7 检测GKT137831提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的LDH与WB结果第88-89页
        4.5.8 使用si RNA沉默NOX4后PAB作用 24h的WB、LDH、H2O2以及MDA检测第89-91页
    4.6 铁离子促进PAB诱导的x CT下调,进而导致谷胱甘肽耗竭第91-97页
        4.6.1 Western Blotting检测PAB时间梯度下诱导胶质瘤GPX4表达量第92页
        4.6.2 使用si RNA沉默GPX4后检测PAB诱导的胶质瘤细胞WB与LDH变化第92-93页
        4.6.3 酶标仪检测PAB高低浓度、长短时程作用胶质瘤后谷胱甘肽含量第93-94页
        4.6.4 检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤谷胱甘肽含量第94页
        4.6.5 检测PAB高低浓度、长短时程作用胶质瘤后半胱氨酸含量.74第94-95页
        4.6.6 检测GSH提前 1h预处理后,PAB作用胶质瘤的MDA含量与LDH变化第95页
        4.6.7 检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的半胱氨酸含量第95页
        4.6.8 Western Blotting检测PAB时间梯度下诱导胶质瘤x CT、P53,P-P53表达量第95-96页
        4.6.9 Western Blotting检测DFO,FAC提前 1h预处理后,PAB作用 24h后胶质瘤的x CT、P53,P-P53表达量第96-97页
    4.7 体内实验中PAB抑制肿瘤组织生长,呈现剂量相关性第97-101页
        4.7.1 裸鼠荷瘤大体图片以及不同组内裸鼠肿瘤平均体积第97-98页
        4.7.2 检测不同组内裸鼠肿瘤的铁离子水平第98-99页
        4.7.3 Western Blotting法检测不同组内裸鼠肿瘤铁离子转运相关蛋白变化第99页
        4.7.4 检测不同组内裸鼠肿瘤的过氧化氢以及丙二醛水平第99-100页
        4.7.5 检测不同组内裸鼠肿瘤的谷胱甘肽以及半胱氨酸水平第100-101页
    4.8 土槿皮乙酸 PAB 诱发胶质瘤 Ferroptosis 的分子机制模式图第101-103页
第5章 讨论第103-107页
第6章 结论第107-109页
参考文献第109-129页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第129-131页
致谢第131页

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