| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 一、关于CRISPR/Cas9脱靶的研究(综述部分) | 第11-23页 |
| 1 CRISPR/Cas9及其原理简介 | 第11-12页 |
| 2 CRISPR/Cas9打靶效率的影响因素 | 第12-13页 |
| 2.1 PAM序列对CRISPR/Cas9打靶效率的影响 | 第12页 |
| 2.2 Cas9/sgRNA的丰度对CRISPR/Cas9打靶效率的影响 | 第12页 |
| 2.3 gRNA对CRISPR/Cas9打靶效率的影响 | 第12-13页 |
| 3 CRISPR/Cas9打靶效率的优化 | 第13-16页 |
| 3.1 FokⅠ核酸酶(RFN)和Cas9融合体对CRISPR/Cas9打靶效率的优化 | 第13-14页 |
| 3.2 打破PAM的结构限制对CRISPR/Cas9打靶效率的优化 | 第14-15页 |
| 3.3 在人细胞中使用截短gRNA对CRISPR/Cas9打靶效率的优化 | 第15-16页 |
| 4 CRISPR/Cas9的广泛应用 | 第16-19页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9系统在肿瘤中的应用 | 第16-17页 |
| 4.2 CRISPR/Cas9系统在植物育种中的应用 | 第17-18页 |
| 4.3 CRISPR/Cas9系统在海洋生物中的应用 | 第18页 |
| 4.4 CRISPR/Cas9系统在动物领域中的应用 | 第18-19页 |
| 5 展望 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-23页 |
| 二、截短gRNA降低牛MSTN基因敲除脱靶效率的研究 | 第23-49页 |
| 1 引言 | 第23-24页 |
| 2 材料与设备 | 第24-26页 |
| 2.1 试剂和材料 | 第24-25页 |
| 2.2 仪器和设备 | 第25页 |
| 2.3 实验所用的培养基及其他液体配方 | 第25-26页 |
| 3 实验方法 | 第26-32页 |
| 3.1 CRISPR/Cas9质粒和GFP质粒的提取与检测 | 第26-28页 |
| 3.2 脱靶位点的寻找及引物的设计 | 第28-29页 |
| 3.3 原代牛胎儿成纤维细胞的获得 | 第29页 |
| 3.4 牛胎儿成纤维细胞电转染条件的摸索 | 第29-30页 |
| 3.5 CRISPR/Cas9质粒向牛胎儿成纤维细胞的电转染 | 第30-31页 |
| 3.6 牛胎儿成纤维细胞单克隆细胞株的建立 | 第31页 |
| 3.7 PCR检测与测序 | 第31页 |
| 3.8 脱靶效率的计算 | 第31-32页 |
| 4 结果 | 第32-45页 |
| 4.1 CRISPR/Cas9质粒的检测结果 | 第32页 |
| 4.2 确定脱靶位点的结果 | 第32页 |
| 4.3 牛胎儿成纤维细胞电转染条件摸索与优化的结果 | 第32-33页 |
| 4.4 牛胎儿成纤维单克隆细胞株的获得、PCR检测与测序的结果 | 第33-34页 |
| 4.5 脱靶效率计算的结果 | 第34-45页 |
| 5 讨论 | 第45-46页 |
| 6 结论 | 第46页 |
| 7 文章小结 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
