| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| 1.1 支原体概述 | 第11-12页 |
| 1.2 绵羊肺炎支原体的生物学特性 | 第12-13页 |
| 1.2.1 形态特性 | 第12页 |
| 1.2.2 培养特性 | 第12-13页 |
| 1.2.3 遗传特性 | 第13页 |
| 1.3 绵羊支原体性肺炎的流行概况 | 第13-14页 |
| 1.3.1 流行病学 | 第13页 |
| 1.3.2 临床症状 | 第13-14页 |
| 1.3.3 病理变化 | 第14页 |
| 1.4 致病机制 | 第14-15页 |
| 1.4.1 免疫性 | 第15页 |
| 1.5 实验室诊断 | 第15-17页 |
| 1.5.1 分离培养 | 第15页 |
| 1.5.2 血清学鉴定 | 第15-16页 |
| 1.5.3 分子生物学检测 | 第16-17页 |
| 1.6 防治措施 | 第17页 |
| 1.7 本研究的目的及其意义 | 第17-18页 |
| 2 绵羊肺炎支原体P130-3的原核表达 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.3 主要溶液 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第20页 |
| 2.2.2 P130-3基因的扩增与克隆 | 第20-21页 |
| 2.2.3 PCR产物胶回收 | 第21页 |
| 2.2.4 P130-3基因原核表达载体的构建 | 第21页 |
| 2.2.5 重组质粒转化 | 第21页 |
| 2.2.6 重组质粒的PCR鉴定 | 第21-22页 |
| 2.2.7 阳性重组质粒的提取 | 第22页 |
| 2.2.8 重组质粒的双酶切鉴定 | 第22页 |
| 2.2.9 重组质粒转化到表达宿主菌 | 第22页 |
| 2.2.10 融合蛋白的表达及最佳IPTG诱导浓度的确定 | 第22-23页 |
| 2.2.11 融合蛋白最佳诱导时间的确定 | 第23页 |
| 2.2.12 重组蛋白的纯化 | 第23页 |
| 2.2.13 重组蛋白的浓缩 | 第23-24页 |
| 2.2.14 重组蛋白的Western blot分析 | 第24-25页 |
| 2.3 结果 | 第25-27页 |
| 2.3.1 P130-3基因的扩增 | 第25页 |
| 2.3.2 重组表达载体的构建及鉴定 | 第25-26页 |
| 2.3.3 融合蛋白诱导表达条件的优化 | 第26-27页 |
| 2.3.4 重组蛋白的反应原性鉴定 | 第27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 3 基于P130-3蛋白的绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法的建立 | 第28-40页 |
| 3.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 试验血清 | 第28页 |
| 3.1.2 仪器、设备 | 第28页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第28页 |
| 3.1.4 主要溶液 | 第28-29页 |
| 3.2 试验方法 | 第29-31页 |
| 3.2.1 方法、步骤 | 第29页 |
| 3.2.2 间接ELISA试验最佳工作条件的优化 | 第29-30页 |
| 3.2.3 阴阳判定临界值的确定 | 第30页 |
| 3.2.4 特异性试验 | 第30页 |
| 3.2.5 敏感性试验 | 第30-31页 |
| 3.2.6 重复性试验 | 第31页 |
| 3.2.7 临床样品的检测 | 第31页 |
| 3.3 结果 | 第31-38页 |
| 3.3.1 P130-3-ELISA反应最佳工作条件的确定 | 第31-32页 |
| 3.3.2 抗原蛋白最佳包被条件的确定 | 第32-33页 |
| 3.3.3 一抗最佳孵育条件的确定 | 第33页 |
| 3.3.4 最佳封闭液的选择 | 第33-34页 |
| 3.3.5 最佳酶标二抗工作浓度的确定 | 第34页 |
| 3.3.6 P130-3-ELISA判定标准的确定 | 第34页 |
| 3.3.7 特异性实验 | 第34-35页 |
| 3.3.8 敏感性实验 | 第35页 |
| 3.3.9 重复性实验 | 第35-36页 |
| 3.3.10 临床样品的检查 | 第36-38页 |
| 3.4 讨论 | 第38-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 4 全文总结 | 第40-41页 |
| 致谢 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-46页 |
| 作者简介 | 第46页 |
