| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 油体的研究进展 | 第11-17页 |
| 1.1.1 油体的结构与组成 | 第11-12页 |
| 1.1.2 油体的生物合成 | 第12-15页 |
| 1.1.2.1 脂肪酸的活化 | 第13页 |
| 1.1.2.2 中性脂质的合成 | 第13-14页 |
| 1.1.2.3 磷脂的重塑 | 第14-15页 |
| 1.1.3 油体的降解 | 第15页 |
| 1.1.4 油体的分布 | 第15-17页 |
| 1.1.4.1 植物种子中的油体 | 第15-16页 |
| 1.1.4.2 植物花朵中的油体 | 第16-17页 |
| 1.1.4.3 植物果实中的油体 | 第17页 |
| 1.2 油体蛋白研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 油体膜蛋白 | 第17-18页 |
| 1.2.2 油体钙蛋白 | 第18-19页 |
| 1.2.3 油体固醇蛋白 | 第19页 |
| 1.3 本课题的目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 牡丹种子油体的发育特点研究 | 第20-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 2.1.4 牡丹籽油的出油率与脂肪酸成分分析 | 第21-22页 |
| 2.1.5 牡丹油体的形态观察 | 第22页 |
| 2.1.5.1 石蜡切片观察 | 第22页 |
| 2.1.5.2 超微结构观察 | 第22页 |
| 2.1.6 油体的粒度与电位测定 | 第22-23页 |
| 2.1.7 油体的稳定性研究 | 第23页 |
| 2.1.8 牡丹种子中油体蛋白的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.1.8.1 油体蛋白的提取与SDS-PAGE电泳分析 | 第23页 |
| 2.1.8.2 利用MALDI-TOF-MS鉴定牡丹油体蛋白 | 第23-24页 |
| 2.2 结果与分析 | 第24-30页 |
| 2.2.1 牡丹种子中脂肪酸积累模式 | 第24-25页 |
| 2.2.2 牡丹油体的形态与分布观察 | 第25-26页 |
| 2.2.3 牡丹油体的粒度与Zeta电位分析 | 第26-27页 |
| 2.2.4 牡丹油体的稳定性研究 | 第27-28页 |
| 2.2.5 牡丹种子中油体蛋白的鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.5.1 牡丹油体蛋白的SDS-PAGE电泳分析 | 第28-29页 |
| 2.2.5.2 牡丹油体蛋白的鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 牡丹OLEs的克隆与表达特性分析 | 第32-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-48页 |
| 3.1.1 植物材料、载体质粒及菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33页 |
| 3.1.4 主要培养基的配置 | 第33-34页 |
| 3.1.5 抗生素的配制 | 第34页 |
| 3.1.6 牡丹OLEs的克隆 | 第34-38页 |
| 3.1.6.1 cDNA序列扩增 | 第34-38页 |
| 3.1.6.2 PCR产物的鉴定 | 第38页 |
| 3.1.7 基因表达分析 | 第38-40页 |
| 3.1.7.1 引物设计 | 第38-39页 |
| 3.1.7.2 荧光定量-RNA反转录 | 第39页 |
| 3.1.7.3 荧光定量PCR | 第39-40页 |
| 3.1.8 亚细胞定位 | 第40-43页 |
| 3.1.8.1 pBWA (V) HS-PoOLE17.5-osgfp载体构建流程 | 第40-42页 |
| 3.1.8.2 转化及拍照 | 第42-43页 |
| 3.1.9 PoOLEs基因的超表达载体构建 | 第43-46页 |
| 3.1.9.1 反转录cDNA第一链合成 | 第43-44页 |
| 3.1.9.2 目的片段的扩增 | 第44-45页 |
| 3.1.9.3 质粒提取 | 第45页 |
| 3.1.9.4 目的基因(含酶切位点)的获取 | 第45页 |
| 3.1.9.5 pCAMBIA1301双酶切及产物回收 | 第45-46页 |
| 3.1.10 采用冻融法将表达载体转入农杆菌 | 第46-47页 |
| 3.1.10.1 农杆菌的活化 | 第46-47页 |
| 3.1.10.2 农杆菌感受态细胞的制备 | 第47页 |
| 3.1.10.3 农杆菌转化及保存 | 第47页 |
| 3.1.11 烟草叶片的遗传转化 | 第47-48页 |
| 3.1.11.1 烟草的培养 | 第47-48页 |
| 3.1.11.2 农杆菌介导的叶盘法侵染烟草 | 第48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-59页 |
| 3.2.1 牡丹OLEs序列克隆 | 第48-50页 |
| 3.2.2 牡丹OLEs的生物信息学分析 | 第50-52页 |
| 3.2.2.1 牡丹OLEs的同源性分析 | 第50页 |
| 3.2.2.2 牡丹OLEs编码蛋白的亲疏水性和跨膜结构域 | 第50-52页 |
| 3.2.2.3 牡丹OLEs编码蛋白的保守结构域和三维模型 | 第52页 |
| 3.2.3 牡丹OLEs的表达模式检测 | 第52-53页 |
| 3.2.4 牡丹OLE17.5的亚细胞定位观察 | 第53-55页 |
| 3.2.4.1 重组质粒的酶切验证 | 第53-54页 |
| 3.2.4.2 荧光观察 | 第54-55页 |
| 3.2.5 牡丹OLEs的表达载体构建 | 第55-58页 |
| 3.2.5.1 cDNA全长序列的克隆 | 第55-56页 |
| 3.2.5.2 基因序列分析 | 第56-57页 |
| 3.2.5.3 目的基因编码区(含酶切位点)的获取 | 第57页 |
| 3.2.5.4 pCAMBIA1301-PoOLEs超表达载体构建及验证 | 第57-58页 |
| 3.2.6 烟草遗传转化实验 | 第58-59页 |
| 3.3 讨论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第72-73页 |
