| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 精子发生的细胞和分子的调控机制研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1 精子发生过程 | 第12-14页 |
| 1.2 精子发生过程中的基因表达调控 | 第14-16页 |
| 2 miRNA在精子发生过程中的作用 | 第16-19页 |
| 3 miRNA沉默技术 | 第19-23页 |
| 3.1 遗传敲除 | 第21页 |
| 3.2 miRNA sponge | 第21-22页 |
| 3.3 寡聚核苷酸技术一antimiR | 第22-23页 |
| 3.4 miRNA zipper | 第23页 |
| 4 TGFβ通路在精子发生过程中的作用 | 第23-25页 |
| 5 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 精子发生中各生殖系细胞miRNA的表达 | 第26-44页 |
| 1 引言 | 第26页 |
| 2 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1 实验动物 | 第26页 |
| 2.2 主要仪器、试剂、数据库及软件 | 第26-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-31页 |
| 3.1 精子发生过程中不同阶段细胞的分离与鉴定 | 第27-30页 |
| 3.2 RNA提取、文库构建与Illummina HiSeq 2500测序 | 第30-31页 |
| 4 生物信息学分析 | 第31-33页 |
| 4.1 测序数据过滤 | 第31页 |
| 4.2 基因组比对 | 第31-32页 |
| 4.3 small RNA分类注释 | 第32页 |
| 4.4 miRNA差异表达分析 | 第32页 |
| 4.5 miRNA靶基因预测 | 第32页 |
| 4.6 miRNA靶基因关系网络图 | 第32页 |
| 4.7 KEGG和GO分析 | 第32-33页 |
| 5 结果分析 | 第33-41页 |
| 5.1 精子发生过程中各级细胞的分析与鉴定 | 第33页 |
| 5.2 small RNA测序结果分析 | 第33-41页 |
| 5.3 small RNA数据的验证 | 第41页 |
| 6 讨论 | 第41-44页 |
| 第三章 miRNA-202-5p靶向调控LIMK2参与精子发生 | 第44-51页 |
| 1 引言 | 第44页 |
| 2 实验材料 | 第44页 |
| 2.1 实验动物 | 第44页 |
| 2.2 主要仪器与试剂 | 第44页 |
| 3 实验方法 | 第44-46页 |
| 3.1 精子发生过程中不同阶段生殖系细胞的分离与鉴定 | 第44页 |
| 3.2 总RNA提取 | 第44-45页 |
| 3.3 miR-202-5p与LIMK2基因靶向关系验证 | 第45-46页 |
| 3.4 RT-qPCR | 第46页 |
| 3.5 数据分析及处理 | 第46页 |
| 4 结果分析 | 第46-50页 |
| 4.1 差异表达的miRNA及其靶基因功能注释 | 第46-49页 |
| 4.2 不同生殖系细胞中miR-202-5p及LIMK2表达量 | 第49页 |
| 4.3 miR-202-5p与LIMK2靶向关系验证 | 第49-50页 |
| 5 讨论 | 第50-51页 |
| 第四章 miR-301a-5p通过介导TGFβ与调控精子发生 | 第51-57页 |
| 1 引言 | 第51页 |
| 2 实验材料 | 第51页 |
| 2.1 实验动物 | 第51页 |
| 2.2 主要仪器与试剂 | 第51页 |
| 3 实验方法 | 第51-53页 |
| 3.1 总RNA提取 | 第51页 |
| 3.2 miR-301a-5p与TGFB2基因靶向关系验证 | 第51-52页 |
| 3.3 DF-1的细胞培养、 | 第52页 |
| 3.4 miR-301a-5p mimics与inhibitor的转染 | 第52页 |
| 3.5 TGFβ2基因野生型、突变型载体的构建 | 第52页 |
| 3.6 miR-301a-5p与TGFP2基因靶向关系检测 | 第52页 |
| 3.7 RT-qPCR | 第52-53页 |
| 3.8 RNAi及miR-zipper | 第53页 |
| 3.9 数据分析及处理 | 第53页 |
| 4 结果 | 第53-56页 |
| 4.1 差异miRNA筛选及靶基因预测 | 第53-54页 |
| 4.2 miR-301a-5p通过靶向TGFβ2参与TGPβ通路 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 创新点 | 第58页 |
| 进一步工作设想 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-73页 |
| 附录 | 第73-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第76-77页 |
