| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.1 苹果树腐烂病研究概况 | 第11-13页 |
| 1.1.1 苹果树腐烂病的危害情况 | 第11页 |
| 1.1.2 苹果树腐烂病的危害症状 | 第11页 |
| 1.1.3 苹果树腐烂病菌潜伏侵染研究 | 第11页 |
| 1.1.4 苹果树树腐烂病菌致病机理研究 | 第11-13页 |
| 1.2 丝状真菌基因功能研究方法 | 第13-15页 |
| 1.3 植物病原真菌中细胞壁降解酶的研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3.1 细胞壁降解酶的分类 | 第15页 |
| 1.3.2 细胞壁降解酶与致病性的关系 | 第15-16页 |
| 1.4 植物病原真菌中果胶酶的研究进展 | 第16页 |
| 1.5 多聚半乳糖醛酸酶在植物病原菌中的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5.1 真菌多聚半乳糖醛酸酶及其序列特征 | 第16-17页 |
| 1.5.2 真菌多聚半乳糖醛酸酶的表达调控 | 第17页 |
| 1.5.3 真菌多聚半乳糖醛酸酶与真菌的致病性关系 | 第17-18页 |
| 1.6 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 1.7 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 基因敲除盒的构建 | 第20-27页 |
| 2.1 材料、试剂和仪器 | 第20页 |
| 2.1.1 材料 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 仪器 | 第20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.1 野生型菌株 03-8 基因组 DNA 的提取——CTAB 法 | 第20-21页 |
| 2.2.2 质粒 PHIG2RHPH2-GFP-GUS 的提取 | 第21页 |
| 2.2.3 苹果树腐烂病菌外切多聚半乳糖醛酸酶基因序列的获得与引物设计 | 第21-23页 |
| 2.2.4 Double-joint PCR 方法构建基因敲除盒 | 第23-24页 |
| 2.2.5 PCR 产物浓缩 | 第24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-25页 |
| 2.3.1 PCR 扩增上游片段和下游片段 L1 和 L2，以及潮霉素 HPH 片段 | 第24-25页 |
| 2.3.2 Double-joint PCR 构建敲除载体 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-27页 |
| 第三章 基因敲除和突变体的鉴定 | 第27-34页 |
| 3.1 材料、试剂和仪器 | 第27页 |
| 3.1.1 材料 | 第27页 |
| 3.1.2 试剂 | 第27页 |
| 3.1.3 仪器 | 第27页 |
| 3.2 试验方法 | 第27-31页 |
| 3.2.1 苹果树腐烂病菌原生质体的制备和转化 | 第27-28页 |
| 3.2.2 敲除突变体的筛选和鉴定 | 第28-31页 |
| 3.3 结果 | 第31-32页 |
| 3.3.1 PEG 介导遗传转化获得基因突变体 | 第31页 |
| 3.3.2 PCR 检测突变体 | 第31-32页 |
| 3.3.3 Southern blot 验证突变体 | 第32页 |
| 3.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第四章 敲除突变体的表型观察和致病力检测 | 第34-40页 |
| 4.1 材料、试剂和仪器 | 第34页 |
| 4.1.1 材料 | 第34页 |
| 4.1.2 试剂 | 第34页 |
| 4.1.3 仪器 | 第34页 |
| 4.2 试验方法 | 第34-35页 |
| 4.2.1 基因缺失突变体菌落形态观察 | 第34页 |
| 4.2.2 基因缺失突变体生长速度测定 | 第34页 |
| 4.2.3 基因缺失突变体子实体数量测定 | 第34页 |
| 4.2.4 基因缺失突变体致病性测定 | 第34-35页 |
| 4.3 结果与分析 | 第35-37页 |
| 4.3.1 基因缺失突变体菌落表型观察 | 第35-36页 |
| 4.3.2 基因缺失突变体致病性测定 | 第36-37页 |
| 4.4 讨论 | 第37-40页 |
| 第五章 基因功能回复验证 | 第40-46页 |
| 5.1 材料、试剂和仪器 | 第40页 |
| 5.1.1 材料 | 第40页 |
| 5.1.2 试剂 | 第40页 |
| 5.1.3 仪器 | 第40页 |
| 5.2 试验方法 | 第40-42页 |
| 5.2.1 互补引物的设计 | 第40-41页 |
| 5.2.2 互补载体的构建 | 第41-42页 |
| 5.2.3 酵母质粒转化大肠杆菌及鉴定 | 第42页 |
| 5.2.4 互补载体转化及互补突变体的筛选 | 第42页 |
| 5.2.5 互补突变体功能回复鉴定 | 第42页 |
| 5.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 5.3.1 互补载体的构建 | 第42-43页 |
| 5.3.2 互补突变体的获得 | 第43页 |
| 5.3.3 基因 Vmpgx-1 ，Vmpgx-2 使基因缺失突变体致病力恢复 | 第43-44页 |
| 5.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第六章 全文结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录1 实验所用仪器 | 第52-53页 |
| 附录2 实验所用试剂及培养基配方 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 作者简介及发表文章 | 第57页 |
