| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-19页 |
| 1.1 棉花黄萎病菌的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 棉花黄萎病菌的分类 | 第12页 |
| 1.1.2 棉花黄萎病菌的侵染循环 | 第12-13页 |
| 1.2 棉花黄萎病菌分子致病机理 | 第13-14页 |
| 1.3 丝状真菌基因功能的研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 农杆菌介导的遗传转化 | 第14页 |
| 1.3.2 T-DNA 插入序列的克隆 | 第14-15页 |
| 1.3.3 基因敲除技术 | 第15-16页 |
| 1.3.4 基因表达模式分析 | 第16页 |
| 1.4 CYC8 基因简介 | 第16-17页 |
| 1.5 研究的目的意义及技术路线 | 第17-19页 |
| 1.5.1 研究的目的意义 | 第17-18页 |
| 1.5.2 技术路线 | 第18-19页 |
| 第二章 棉花黄萎病菌低致病力突变体的表型分析及致病相关基因克隆 | 第19-38页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 棉花黄萎病菌菌株来源 | 第19页 |
| 2.1.2 棉花鉴别寄主 | 第19页 |
| 2.1.3 培养基和试剂盒 | 第19-20页 |
| 2.1.4 试剂盒 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-29页 |
| 2.2.1 菌株的活化和培养 | 第20页 |
| 2.2.2 致病力测定 | 第20-21页 |
| 2.2.3 低致病力突变体的筛选 | 第21页 |
| 2.2.4 低致病力突变体生物学性状测定 | 第21页 |
| 2.2.5 低致病力突变体的分子验证 | 第21-25页 |
| 2.2.6 低致病力突变体的 T-DNA 插入侧翼序列的获得和分析 | 第25-28页 |
| 2.2.7 致病相关基因的克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.8 数据分析 | 第29页 |
| 2.3 结果 | 第29-35页 |
| 2.3.1 低致病力突变体的筛选 | 第29-30页 |
| 2.3.2 低致病力突变体的分子检测 | 第30-31页 |
| 2.3.3 低致病力突变体的生物学特性 | 第31-32页 |
| 2.3.4 低致病力突变体的 T-DNA 插入侧翼序列分析 | 第32-35页 |
| 2.3.5 致病相关基因克隆与分析 | 第35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 棉花黄萎病菌致病相关基因 CYC8 敲除和互补载体的构建 | 第38-51页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 培养基 | 第38-39页 |
| 3.1.3 所用抗生素的配制和浓度 | 第39页 |
| 3.2 方法 | 第39-46页 |
| 3.2.1 大丽轮枝菌基因组 DNA 的提取 | 第39页 |
| 3.2.2 敲除载体的构建 | 第39-43页 |
| 3.2.3 互补载体的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.4 质粒转化农杆菌 | 第45-46页 |
| 3.3 结果 | 第46-49页 |
| 3.3.1 敲除载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.3.2 含有敲除质粒的农杆菌的获得 | 第47页 |
| 3.3.3 互补载体的构建 | 第47-48页 |
| 3.3.4 含有互补质粒的农杆菌的获得 | 第48-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 棉花黄萎病菌 CYC8 敲除转化子的获得及功能分析 | 第51-62页 |
| 4.1 材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 菌株 | 第51页 |
| 4.1.2 所用抗生素、底物和诱导剂的配制和使用 | 第51页 |
| 4.1.3 培养基及其配制 | 第51-52页 |
| 4.2 方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 棉花黄萎病菌的 ATMT 转化 | 第52-53页 |
| 4.2.2 CYC8 敲除阳性转化子的鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.3 CYC8 基因功能的分析 | 第54-55页 |
| 4.3 结果 | 第55-61页 |
| 4.3.1 敲除转化子的筛选及鉴定 | 第55-56页 |
| 4.3.2 敲除转化子的生物学特性 | 第56-58页 |
| 4.3.3 胞外酶活性测定 | 第58-60页 |
| 4.3.4 致病力测定 | 第60-61页 |
| 4.4 讨论 | 第61-62页 |
| 第五章 棉花黄萎病菌 CYC8 互补转化子的获得、鉴定及功能分析 | 第62-72页 |
| 5.1 材料 | 第62页 |
| 5.1.1 菌株 | 第62页 |
| 5.1.2 抗生素和诱导剂的配制及使用 | 第62页 |
| 5.1.3 培养基及其配制 | 第62页 |
| 5.2 方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 棉花黄萎病菌的 ATMT 转化 | 第62-63页 |
| 5.2.2 CYC8 互补阳性转化子的鉴定 | 第63-64页 |
| 5.2.3 CYC8 基因功能的分析 | 第64页 |
| 5.3 结果 | 第64-71页 |
| 5.3.1 互补转化子的筛选及鉴定 | 第64-66页 |
| 5.3.2 互补转化子的生物学特性 | 第66-68页 |
| 5.3.3 互补转化子的胞外酶活性测定 | 第68-69页 |
| 5.3.4 致病力测定 | 第69-70页 |
| 5.3.5 互补转化子的致病力与 CYC8 基因表达量的关系 | 第70-71页 |
| 5.4 讨论 | 第71-72页 |
| 第六章 棉花黄萎病菌 CYC8 的表达分析 | 第72-75页 |
| 6.1 材料 | 第72页 |
| 6.1.1 菌株 | 第72页 |
| 6.1.2 培养基及其配制 | 第72页 |
| 6.2 方法 | 第72页 |
| 6.2.1 菌丝的收集及处理 | 第72页 |
| 6.2.2 RNA 的提取和基因表达量的分析 | 第72页 |
| 6.3 结果 | 第72-74页 |
| 6.3.1 CYC8 基因表达分析 | 第72-73页 |
| 6.3.2 CYC8 基因的表达量与葡萄糖的关系 | 第73-74页 |
| 6.4 讨论 | 第74-75页 |
| 第七章 总结 | 第75-77页 |
| 7.1 主要结论 | 第75页 |
| 7.2 创新点 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 作者简介 | 第83页 |
