| 摘要 | 第3-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 减毒猪霍乱沙门氏菌载体的研究进展 | 第12-20页 |
| 符号说明 | 第20-21页 |
| 第一章 减毒猪霍乱沙门氏菌x0011的构建 | 第21-45页 |
| 1 材料 | 第21-22页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第21-22页 |
| 1.2 主要试剂 | 第22页 |
| 1.3 主要耗材及仪器 | 第22页 |
| 1.4 相关主要溶液的配制 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-33页 |
| 2.1 构建减毒猪霍乱沙门氏菌载体的策略 | 第23页 |
| 2.2 引物设计 | 第23-24页 |
| 2.3 含基因缺失自杀载体的构建 | 第24-28页 |
| 2.4 减毒猪霍乱沙门氏菌x0011(△P_(crp)::TT araC P_(BAD crp),△manA,△relA::araC P_(BAD)lacITT和△asdA)的构建 | 第28-32页 |
| 2.5 减毒猪霍乱沙门氏菌x0011(△P_(crp)::TT araC P_(BAD crp),△manA,△relA::araC P_(BAD)lacITT和△asdA)中4种突变的表型鉴定 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-43页 |
| 3.1 猪霍乱沙门氏菌减毒株C78-3(△P_(crp)::TT araC P_(BAD crp))的构建 | 第33-36页 |
| 3.2 C78-3(△P_(crp)::TT araC P_(BAD crp),△manA)猪霍乱沙门氏菌减毒株的构建 | 第36-38页 |
| 3.3 C78-3(△P_(crp)::TT araC P_(BAD crp),△manA,△reIA::araC P_(BAD)lacITT)猪霍乱沙门氏菌减毒株的构建 | 第38-40页 |
| 3.4 C78-3(△_(Pcrp)::TT araC P_(BAD crp),△manA,△relA::araC P_(BAD) lacITT,△asdA)猪霍乱沙门氏菌减毒株的构建 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 第二章 x0011菌株的生物学特性研究 | 第45-54页 |
| 1 材料 | 第45-46页 |
| 1.1 菌株、细胞、小鼠 | 第45页 |
| 1.2 主要试剂 | 第45页 |
| 1.3 主要仪器及耗材 | 第45页 |
| 1.4 主要溶液配制 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| 2.1 x0011(pYA6-PGD)的LD_(50)测定 | 第46页 |
| 2.2 x0011(pYA6-PGD)的定居实验 | 第46页 |
| 2.3 x0011(pYA6-PGD)在猪肺巨噬细胞中的复制实验方法 | 第46-47页 |
| 2.4 x0011(pYA6-PGD)在猪外周血单核细胞中的复制实验 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-53页 |
| 3.1 x0011(pYA6-PGD)、强毒株C78-3、疫苗弱毒株C500的LD_(50)测定结果 | 第48-49页 |
| 3.2 x0011(pYA6-PGD)、x0011(pYA3493)、C500在Balb/c小鼠中的定居实验结果 | 第49-50页 |
| 3.3 x0011(pYA6-PGD)、C78-3、C500在猪肺巨噬细胞中的复制实验结果 | 第50-52页 |
| 3.4 x0011(pYA6-PGD)、C78-3、C500在猪外周血单核细胞中的复制实验结果 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-54页 |
| 第三章 携带猪链球菌6-PGD蛋白减毒沙门氏菌载体的构建及其免疫原性初探 | 第54-68页 |
| 1 材料 | 第54-56页 |
| 1.1 菌株、兔子 | 第54页 |
| 1.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 1.3 主要仪器及耗材 | 第55页 |
| 1.4 主要试剂配制 | 第55-56页 |
| 2 方法 | 第56-59页 |
| 2.1 猪链球菌2型d的LD_(50)和其6-PGD基因的克隆 | 第56-57页 |
| 2.2 pET28a(6-pGD)在BL21中的表达和可溶性蛋白纯化 | 第57页 |
| 2.3 针对6-PGD融合蛋白兔抗血清的制备及其效价的测定 | 第57页 |
| 2.4 x0O11(pYA6-PGD)菌株的构建及其表达 | 第57-59页 |
| 2.5 x0011(pYA6-PGD)生物学特性研究 | 第59页 |
| 3 结果 | 第59-66页 |
| 3.1 6-PGD基因的扩增、连接、转化 | 第59-61页 |
| 3.2 猪链球菌LD_(50)的测定 | 第61页 |
| 3.3 pET28a(6-pGD)在BL21中的表达及可溶性蛋白纯化 | 第61-62页 |
| 3.4 6-PGD融合蛋白兔抗血清的制备及其效价的测定 | 第62-63页 |
| 3.5 x0011(pYA6-PGD)菌株的构建及其表达 | 第63-64页 |
| 3.6 细菌生长曲线测定结果 | 第64-65页 |
| 3.7 pYA6-PGD质粒在x0011(pYA6-PGD)中稳定性传代结果 | 第65页 |
| 3.8 x0011(pYA6-PGD)免疫Balb/c小鼠的抗体水平测定结果 | 第65-66页 |
| 3.9 动物保护性实验 | 第66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 全文小结 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
