| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 植物病原菌黄单胞菌属 | 第12页 |
| 1.2 十字花科黑腐病菌 | 第12-14页 |
| 1.2.1 十字花科黑腐病菌概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 Xcc相关致病生化因子 | 第13-14页 |
| 1.3 Ⅲ型分泌系统 | 第14-17页 |
| 1.3.1 Ⅲ型分泌系统的装置 | 第15-16页 |
| 1.3.2 Ⅲ型分泌系统的调控机制 | 第16页 |
| 1.3.3 Ⅲ型分泌蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4 小分子化合物对Ⅲ型分泌系统的抑制研究 | 第17-23页 |
| 1.4.1 Ⅲ型抑制剂的筛选方法 | 第17-20页 |
| 1.4.2 Ⅲ型抑制剂 | 第20-21页 |
| 1.4.3 金属离子对Ⅲ型分泌系统的影响 | 第21-23页 |
| 1.5 小分子化合物与蛋白互作研究方法概述 | 第23-24页 |
| 1.5.1 荧光偏振法 | 第23页 |
| 1.5.2 等温滴定量热法 | 第23页 |
| 1.5.3 BIACore技术 | 第23-24页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 1.6.1 本研究的目的 | 第24页 |
| 1.6.2 本研究的意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-47页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第26-28页 |
| 2.2 本研究所用的引物 | 第28-29页 |
| 2.3 本研究所用的培养基 | 第29-30页 |
| 2.3.1 培养大肠杆菌的培养基 | 第29页 |
| 2.3.2 培养Xcc的培养基 | 第29-30页 |
| 2.4 各菌株培养条件及菌种保藏 | 第30页 |
| 2.5 常用抗生素及试剂 | 第30-31页 |
| 2.6 常用溶液和缓冲液 | 第31-33页 |
| 2.7 细菌核酸的制备 | 第33-34页 |
| 2.7.1 细菌总DNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.7.2 质粒的提取(碱裂解法) | 第34页 |
| 2.8 琼脂糖凝胶电泳 | 第34-35页 |
| 2.9 分子生物学基本操作 | 第35-38页 |
| 2.9.1 PCR扩增DNA片段 | 第35-36页 |
| 2.9.2 DNA酶切反应 | 第36页 |
| 2.9.3 DNA片段的纯化 | 第36页 |
| 2.9.4 DNA片段的胶回收 | 第36页 |
| 2.9.5 DNA的连接 | 第36-37页 |
| 2.9.6 感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| 2.9.7 转化 | 第38页 |
| 2.10 三亲本结合 | 第38-39页 |
| 2.11 致病性试验 | 第39页 |
| 2.12 β-葡糖醛酸酶(GUS)活性测定 | 第39-42页 |
| 2.12.1 GUS定性检测 | 第39-40页 |
| 2.12.2 GUS定量检测 | 第40-42页 |
| 2.13 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第42-44页 |
| 2.13.1 SDS聚丙烯酰胺凝胶的配制 | 第42-43页 |
| 2.13.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第43页 |
| 2.13.3 蛋白质染色和脱色 | 第43-44页 |
| 2.14 重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第44-45页 |
| 2.14.1 重组蛋白的小量诱导检测 | 第44页 |
| 2.14.2 重组蛋白的大量诱导和纯化 | 第44-45页 |
| 2.15 报告菌株的构建 | 第45页 |
| 2.16 细菌荧光素酶的检测 | 第45-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-74页 |
| 3.1 8004/pLgus3011的构建 | 第47-51页 |
| 3.1.1 构建8004/pLgus3011报告菌株的技术路线 | 第48页 |
| 3.1.2 8004/pLgus3011菌株构建结果 | 第48-50页 |
| 3.1.3 8004/pLgus3011等不同报告菌株GUS活性的定量检测 | 第50-51页 |
| 3.2 金属离子对Ⅲ型装置hrpB1表达的影响 | 第51-56页 |
| 3.2.1 NiCl_2、CoCl_2、CdCl_2和CuCl_2对hrpB1表达的影响 | 第51-52页 |
| 3.2.2 ZnCl_2、MnCl_2、CaCl_2和FeSO_4对hrpB1表达的影响 | 第52-53页 |
| 3.2.3 CrCl_3、AlCl_3、NaCl_和KNO_3对hrpB1表达的影响 | 第53-55页 |
| 3.2.4 MgCl_2对hrpB1表达的影响 | 第55-56页 |
| 3.3 金属离子对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及看家基因XC3806表达的影响 | 第56-64页 |
| 3.3.1 ZnCl_2对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和XC3806表达的影响 | 第57页 |
| 3.3.2 MnCl_2对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和XC3806表达的影响 | 第57-59页 |
| 3.3.3 CaCl_2对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和XC3806表达的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.4 FeSO_4对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和XC3806表达的影响 | 第60-62页 |
| 3.3.5 MgCl_2对Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型和XC3806表达的影响 | 第62-64页 |
| 3.4 低浓度下金属离子化合物对寄主植物满身红萝卜致病性的影响 | 第64-65页 |
| 3.5 重组蛋白的分子构建、表达与纯化 | 第65-67页 |
| 3.5.1 目的基因融合蛋白的分子构建 | 第65-66页 |
| 3.5.2 重组蛋白的表达和纯化 | 第66-67页 |
| 3.6 细菌荧光素酶基因(luxAB)报告系统的构建 | 第67-74页 |
| 3.6.1 构建报告质粒的技术路线 | 第67-68页 |
| 3.6.2 报告质粒pLuxAB的构建结果 | 第68-70页 |
| 3.6.3 分子验证报告质粒 | 第70-73页 |
| 3.6.4 报告系统的检测 | 第73-74页 |
| 第四章 讨论与展望 | 第74-78页 |
| 4.1 关于金属离子对T3SS的影响 | 第74-75页 |
| 4.2 关于金属离子对T2SS、T3SS、T3SS及看家基因的影响 | 第75页 |
| 4.3 关于表达的蛋白 | 第75页 |
| 4.4 关于金属离子的生防作用 | 第75-76页 |
| 4.5 关于高通量的细菌荧光素酶报告系统 | 第76页 |
| 4.6 后续工作 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第88页 |
