| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-27页 |
| 1. 鹅卵黄性腹膜炎 | 第11-12页 |
| 1.1 病原学 | 第11页 |
| 1.2 流行病学 | 第11-12页 |
| 1.3 诊断和防治 | 第12页 |
| 2. 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌OmpA | 第12-16页 |
| 2.1 OmpA的基本结构和功能 | 第13-14页 |
| 2.2 OmpA的研究进展 | 第14-16页 |
| 3. Red/ET同源重组技术 | 第16-22页 |
| 3.1 Red/ET重组系统的作用机制 | 第16-18页 |
| 3.2 Red/ET重组系统相关质粒 | 第18-20页 |
| 3.3 Red/ET重组技术的应用展望 | 第20-22页 |
| 参考文献 | 第22-27页 |
| 研究一 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A的克隆表达 | 第27-38页 |
| 摘要 | 第27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-33页 |
| 1.1 菌种与载体 | 第27页 |
| 1.2 试剂与培养基 | 第27-28页 |
| 1.3 引物设计及合成 | 第28页 |
| 1.4 PCR扩增目的基因 | 第28-29页 |
| 1.5 目的基因ompA的克隆及测序 | 第29-32页 |
| 1.6 OmpA融合蛋白的表达及最佳表达条件摸索 | 第32页 |
| 1.7 His-OmpA蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 2. 结果与分析 | 第33-37页 |
| 2.1 ompA片段的PCR扩增结果 | 第33页 |
| 2.2 目的片段和表达载体的酶切结果 | 第33-34页 |
| 2.3 重组质粒pET-32a-ompA的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4 OmpA重组质粒表达条件摸索结果 | 第35-36页 |
| 2.5 His-OmpA蛋白纯化后的SDS-PAGE | 第36-37页 |
| 3. 讨论 | 第37-38页 |
| 研究二 抗致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A单克隆抗体的制备 | 第38-51页 |
| 摘要 | 第38页 |
| 1 材料与方法 | 第38-44页 |
| 1.1 免疫原、细胞及实验动物 | 第38页 |
| 1.2 试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 主要仪器 | 第39页 |
| 1.4 动物免疫 | 第39页 |
| 1.5 筛选最适包被抗原量确定 | 第39-40页 |
| 1.6 细胞融合 | 第40-41页 |
| 1.7 阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第41-42页 |
| 1.8 单克隆抗体的亚类鉴定 | 第42页 |
| 1.9 腹水的制备及单抗效价的测定 | 第42页 |
| 1.10 单克隆抗体特异性的鉴定 | 第42-43页 |
| 1.11 Western-blot验证OmpA在细菌中的分布情况 | 第43-44页 |
| 2. 结果与分析 | 第44-49页 |
| 2.1 单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立 | 第44-45页 |
| 2.2 单克隆抗体特异性的鉴定结果 | 第45-46页 |
| 2.3 抗OmpA单克隆抗体的亚类鉴定结果 | 第46-47页 |
| 2.4 抗OmpA单克隆抗体的效价测定及腹水的特异性鉴定 | 第47-48页 |
| 2.5 Western-blot验证OmpA在细菌中的分布情况 | 第48-49页 |
| 3. 讨论 | 第49-51页 |
| 研究三 致鹅卵黄性腹膜炎大肠杆菌外膜蛋白A基因缺失株的构建及其相关功能分析 | 第51-65页 |
| 摘要 | 第51页 |
| 1 材料与方法 | 第51-56页 |
| 1.1 菌株、质粒及培养基 | 第51页 |
| 1.2 主要仪器和引物 | 第51-52页 |
| 1.3 引物设计 | 第52-53页 |
| 1.4 50bp同源臂FRT卡那霉素抗性片段的扩增及回收 | 第53页 |
| 1.5 pRedET质粒及含同源臂抗性片段的电转化 | 第53-54页 |
| 1.6 AompA菌的鉴定 | 第54-55页 |
| 1.7 ΔompA G8107大肠杆菌与G8107大肠杆菌生物学特性对比 | 第55-56页 |
| 1.8 动物实验 | 第56页 |
| 2. 结果与分析 | 第56-63页 |
| 2.1 含50bp同源臂FRT卡那霉素抗性片段PCR扩增 | 第56-57页 |
| 2.2 ompA基因缺失G8107大肠杆菌菌株的鉴定 | 第57-58页 |
| 2.3 ΔompA G8107大肠杆菌生物学特性鉴定 | 第58-60页 |
| 2.4 动物实验 | 第60-63页 |
| 3. 讨论 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
