牛肠道病毒BJ101株感染性cDNA克隆的构建及病毒拯救
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-11页 |
| 1 引言 | 第11-20页 |
| 1.1 牛肠道病毒概述 | 第11-17页 |
| 1.1.1 牛肠道病毒的形态与基因组结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 非编码区功能 | 第12页 |
| 1.1.3 编码区功能 | 第12-13页 |
| 1.1.4 病毒的复制 | 第13-14页 |
| 1.1.5 病毒的理化性质 | 第14页 |
| 1.1.6 牛肠道病毒的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.7 牛肠道病毒的致病机制 | 第15页 |
| 1.1.8 牛肠道病毒的流行 | 第15-16页 |
| 1.1.9 牛肠道病毒的检测 | 第16-17页 |
| 1.2 反向遗传学 | 第17-19页 |
| 1.2.1 RNA病毒的反向遗传学研究 | 第17-18页 |
| 1.2.2 反向遗传在肠道病毒中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-39页 |
| 2.1 材料 | 第20-22页 |
| 2.1.1 病料与细胞 | 第20页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第20页 |
| 2.1.3 单克隆抗体 | 第20-21页 |
| 2.1.4 主要设备和仪器 | 第21页 |
| 2.1.5 试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.6 溶液配制 | 第22页 |
| 2.2 方法 | 第22-39页 |
| 2.2.1 牛肠道病毒分离鉴定及全基因组分析 | 第22-29页 |
| 2.2.2 牛肠道病毒的感染性分子克隆的构建 | 第29-39页 |
| 3 结果 | 第39-54页 |
| 3.1 病毒的分离 | 第39页 |
| 3.2 RT-PCR鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3 病毒的蚀斑纯化 | 第40页 |
| 3.4 病毒在MDBK上的TCID50 | 第40-41页 |
| 3.5 BJ101毒株电镜观察 | 第41页 |
| 3.6 全基因组扩增结果 | 第41-43页 |
| 3.7 全基因组序列分析 | 第43-47页 |
| 3.7.1 BJ101毒株基因组分析 | 第43页 |
| 3.7.2 基因组核苷酸序列同源性比较 | 第43-45页 |
| 3.7.3 基因组氨基酸序列同源性比较 | 第45页 |
| 3.7.4 遗传进化分析 | 第45-47页 |
| 3.8 病毒全长基因组的克隆 | 第47页 |
| 3.9 载体的改造 | 第47-48页 |
| 3.10 全长cDNA克隆的酶切鉴定 | 第48页 |
| 3.11 重组质粒线性化 | 第48-49页 |
| 3.12 拯救病毒的鉴定 | 第49-52页 |
| 3.12.1 拯救病毒的传代 | 第49页 |
| 3.12.2 遗传标记的鉴定 | 第49-50页 |
| 3.12.3 拯救病毒基因组测序 | 第50-51页 |
| 3.12.4 Western Blot结果 | 第51-52页 |
| 3.12.5 间接免疫荧光 | 第52页 |
| 3.12.6 电镜观察结果 | 第52页 |
| 3.13 拯救病毒的TCID50 | 第52-53页 |
| 3.14 病毒的生长曲线 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 4.1 病毒全基因序列测序 | 第54页 |
| 4.2 BJ101基因组分析 | 第54-55页 |
| 4.3 全长cDNA感染性克隆的构建 | 第55页 |
| 4.4 病毒拯救 | 第55-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第66-67页 |
| 附件 | 第67-68页 |
| 作者简介 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 详细摘要 | 第70-71页 |
