| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第13-29页 |
| 1.1 细胞中的氧化还原调控 | 第13-16页 |
| 1.1.1 氧化还原调控的种类 | 第13-14页 |
| 1.1.2 巯基/二硫键氧化还原状态的转化 | 第14-15页 |
| 1.1.3 巯基/二硫键对蛋白质功能的影响 | 第15-16页 |
| 1.2 二硫键的还原系统 | 第16-19页 |
| 1.2.1 硫氧还蛋白系统 | 第16-18页 |
| 1.2.2 谷氧还蛋白系统 | 第18-19页 |
| 1.3 二硫键的氧化系统 | 第19-23页 |
| 1.3.1 Dsb酶系统 | 第19-20页 |
| 1.3.2 VKOR酶系统 | 第20-22页 |
| 1.3.3 蛋白质二硫键异构酶酶系统 | 第22-23页 |
| 1.4 植物体内巯基/二硫键转化 | 第23-26页 |
| 1.4.1 内质网中的巯基/二硫键转化 | 第23-24页 |
| 1.4.2 叶绿体中的巯基/二硫键转化 | 第24-26页 |
| 1.5 蛋白质二硫键异构酶在植物中的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-51页 |
| 2.1 材料 | 第29-31页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第29页 |
| 2.1.3 酶、试剂盒与各种生化试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第30-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-51页 |
| 2.2.1 拟南芥AtPDIL1原核表达载体的构建 | 第31-37页 |
| 2.2.1.1 拟南芥AtPDIL1序列的扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.1.2 AtPDIL1克隆载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.1.3 AtPDIL1原核表达载体的构建 | 第33-37页 |
| 2.2.2 AtPDIL1蛋白质的表达和纯化 | 第37-39页 |
| 2.2.2.1 AtPDIL1的诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.2.2.2 亲和层析法纯化AtPDIL1蛋白 | 第38-39页 |
| 2.2.2.3 蛋白质纯度检测 | 第39页 |
| 2.2.3 AtPDIL1异构酶活性测定 | 第39-40页 |
| 2.2.3.1 RNaseA的变性 | 第39-40页 |
| 2.2.3.2 RNaseA的氧化错配 | 第40页 |
| 2.2.3.3 透析 | 第40页 |
| 2.2.3.4 复性及活性测定 | 第40页 |
| 2.2.4 AtPDIL1突变体质粒的获得 | 第40-42页 |
| 2.2.5 AtPDIL1植物表达载体的构建 | 第42-45页 |
| 2.2.6 植物材料的培养与处理 | 第45-46页 |
| 2.2.7 CTAB法提取拟南芥基因组DNA | 第46页 |
| 2.2.8 Trizol法提取拟南芥的RNA | 第46-47页 |
| 2.2.9 拟南芥花絮侵染 | 第47页 |
| 2.2.10 农杆菌介导的瞬时侵染 | 第47-48页 |
| 2.2.11 T-DNA插入突变纯合体的鉴定 | 第48-49页 |
| 2.2.12 实时荧光定量PCR | 第49-50页 |
| 2.2.12.1 cDNA的获得 | 第49页 |
| 2.2.12.2 实时荧光定量PCR反应体系和程序 | 第49-50页 |
| 2.2.13 GUS组织化学染色 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-67页 |
| 3.1 拟南芥AtPDIL1的生物信息学分析 | 第51-52页 |
| 3.1.1 AtPDIL1序列保守性分析 | 第51页 |
| 3.1.2 AtPDIL1的三维结构分析 | 第51-52页 |
| 3.2 拟南芥AtPDIL1基因的克隆及表达载体的构建 | 第52-54页 |
| 3.2.1 AtPDIL1基因的PCR克隆 | 第52-53页 |
| 3.2.2 重组质粒的PCR鉴定 | 第53页 |
| 3.2.3 原核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| 3.3 拟南芥AtPDIL1异构酶活性的测定 | 第54-55页 |
| 3.3.1 AtPDIL1原核表达及蛋白质纯化 | 第54页 |
| 3.3.2 AtPDIL1异构酶活性的测定 | 第54-55页 |
| 3.4 拟南芥AtPDIL1的表达在原核系统逆境胁迫中的作用 | 第55-57页 |
| 3.5 拟南芥AtPDL1的抗逆功能和异构酶活性相关 | 第57-60页 |
| 3.5.1 AtPDIL1保守半胱氨酸位点突变 | 第57页 |
| 3.5.2 半胱氨酸突变影响AtPDIL1的异构酶活性 | 第57-58页 |
| 3.5.3 半胱氨酸突变影响AtPDIL1抗胁迫功能 | 第58-60页 |
| 3.6 拟南芥AtPDIL1的表达受到胁迫的诱导 | 第60-62页 |
| 3.6.1 AtPDIL1在拟南芥各组织的表达 | 第60-61页 |
| 3.6.2 AtPDIL1的表达量受胁迫诱导 | 第61-62页 |
| 3.7 AtPDIL1在拟南芥中具有抗胁迫的功能 | 第62-67页 |
| 3.7.1 AtPDIL1超表达株系的获得和鉴定 | 第62-63页 |
| 3.7.2 AtPDIL1基因Knockdown突变纯合体的鉴定 | 第63-64页 |
| 3.7.3 胁迫条件下AtPDIL1超表达株系、突变体株系的表型特征 | 第64-67页 |
| 4 讨论 | 第67-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读学位期间发表的论文 | 第80页 |
