| 摘要 | 第4-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 英文缩略语 | 第13-19页 |
| 第一部分：咪达唑仑对人肺癌A549细胞凋亡的影响 | 第19-33页 |
| 1 前言 | 第19-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验细胞株 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 A549肺癌细胞的培养 | 第23-24页 |
| 2.3 咪达唑仑干预A549细胞 | 第24-26页 |
| 2.3.1 MTT检测咪达唑仑诱导A549细胞凋亡 | 第24页 |
| 2.3.2 免疫荧光 | 第24-25页 |
| 2.3.3 死/活染色观察咪达唑仑作用后A549细胞的生长情况 | 第25页 |
| 2.3.4 流式细胞仪观察A549细胞的凋亡情况 | 第25页 |
| 2.3.5 Westernblot检测咪达唑仑对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响 | 第25-26页 |
| 2.4 统计分析 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-31页 |
| 3.1 MTT结果 | 第27页 |
| 3.2 DAPI染色结果 | 第27-28页 |
| 3.3 死/活染色观察A549细胞生长状况 | 第28页 |
| 3.4 流式细胞术检测A549细胞凋亡 | 第28-29页 |
| 3.5 Western-blot检测观察凋亡相关蛋白表达 | 第29-31页 |
| 4 讨论 | 第31-32页 |
| 5 结论 | 第32-33页 |
| 第二部分：STAT3信号通路在咪达唑仑促人肺癌A549细胞凋亡作用中的变化 | 第33-45页 |
| 1 前言 | 第33-34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-39页 |
| 2.1 主要仪器设备及试剂 | 第34-35页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第34页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材 | 第34-35页 |
| 2.2 实验步骤 | 第35-39页 |
| 2.3 统计学处理 | 第39页 |
| 3 结果 | 第39-43页 |
| 3.1 各组A549细胞STAT3蛋白的表达 | 第39页 |
| 3.2 STAT3siRNA转染A549细胞后STAT3表达的改变 | 第39-40页 |
| 3.3 STAT3siRNA转染后A549细胞活力的改变 | 第40页 |
| 3.4 siRNA转染后A549细胞形态的影响 | 第40-41页 |
| 3.5 流式细胞仪检测A549细胞转染STAT3siRNA后细胞凋亡情况 | 第41-42页 |
| 3.6 WesternBlot结果 | 第42-43页 |
| 4 讨论 | 第43-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 第三部分：咪达唑仑通过miR-520d在A549细胞系中对STAT3的调节诱导肺癌细胞凋亡的机制研究 | 第45-58页 |
| 1 前言 | 第45-46页 |
| 2 材料与方法 | 第46-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 2.1.1 应用生物信息学工具对miR-520家族的可能靶基因进行预测 | 第46页 |
| 2.1.2 细胞株 | 第46页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第46页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第46-47页 |
| 2.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 2.2.1 实验分组 | 第47页 |
| 2.2.2 采用RT-PCR法检测10μg/ml咪达唑仑作用于A549细胞48h后miR-520dmRNA的表达情况 | 第47-48页 |
| 2.2.3 采用WesternBlot法检测咪达唑仑(10μg/ml)作用于A549细胞48h后STAT3蛋白的表达情况 | 第48页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第48-49页 |
| 2.3 统计学分析 | 第49页 |
| 3 结果 | 第49-55页 |
| 3.1 生物信息学工具预测 | 第49页 |
| 3.2 转染miR-520dmimic后STAT3蛋白表达 | 第49-50页 |
| 3.3 转染miRNA-520dinhibitor后STAT3蛋白表达 | 第50页 |
| 3.4 双荧光素酶报告系统 | 第50-51页 |
| 3.5 咪达唑仑干预后A549细胞中miR-520d表达变化 | 第51页 |
| 3.6 各组A549细胞活力的变化 | 第51-52页 |
| 3.7 流式细胞技术检测各组细胞凋亡率 | 第52-53页 |
| 3.8 Westernblot检测咪达唑仑联合miRNA-520dmimic转染干预后A549细胞中凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、casepase-3)以及STAT3的变化 | 第53-54页 |
| 3.9 Westernblot检测咪达唑仑联合miRNA-520dinhibotor转染干预后A549细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、casepase-3)以及STAT3的变化 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 第四部分：咪达唑仑对肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用和机制 | 第58-70页 |
| 1 前言 | 第58页 |
| 2 材料和方法 | 第58-64页 |
| 2.1 细胞株 | 第58页 |
| 2.2 实验动物 | 第58-59页 |
| 2.3 实验器材 | 第59页 |
| 2.4 实验试剂 | 第59-61页 |
| 2.5 主要试剂配制 | 第61页 |
| 2.6 动物模型建立 | 第61页 |
| 2.7 分组及给药 | 第61-62页 |
| 2.8 HE染色观察肿瘤病理变化 | 第62页 |
| 2.8.1 制备病理切片 | 第62页 |
| 2.8.2 HE染色 | 第62页 |
| 2.9 TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡 | 第62页 |
| 2.10 免疫组织化学检测移植瘤组织中Ki67的表达 | 第62-63页 |
| 2.11 蛋白质印迹法检测STAT3蛋白的表达 | 第63页 |
| 2.12 统计分析 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-68页 |
| 3.1 咪达唑仑对A549细胞皮下移植瘤生长的影响 | 第64-65页 |
| 3.2 HE染色结果 | 第65-66页 |
| 3.3 TUNEL染色 | 第66页 |
| 3.4 免疫组化显示移植瘤组织中Ki67的变化 | 第66-67页 |
| 3.5 Western-blot法检测咪达唑仑对荷瘤裸鼠肺癌肿瘤组织STAT3蛋白表达的影响 | 第67-68页 |
| 4 讨论 | 第68-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 综述 | 第79-91页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 个人简介 | 第93页 |
