| 目录 | 第4-7页 |
| CONTENTS | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 Taq DNA聚合酶的研究进展 | 第14-28页 |
| 第一节 Taq DNA聚合酶的简介 | 第14-17页 |
| 1.1 Taq DNA聚合酶的发现 | 第14-15页 |
| 1.2 Taq DNA聚合酶的基本性质与结构 | 第15-17页 |
| 第二节 Taq DNA聚合酶的修饰 | 第17-22页 |
| 2.1 提高Taq DNA聚合酶的扩增速率 | 第17页 |
| 2.2 提高Taq DNA聚合酶的忠实性和续进性 | 第17-18页 |
| 2.3 提高Taq DNA聚合酶的耐热性 | 第18-19页 |
| 2.4 降低Taq DNA聚合酶的5’-3’核酸外切酶活性 | 第19页 |
| 2.5 降低Taq DNA聚合酶对ddNTPs的抵抗 | 第19-20页 |
| 2.6 Taq DNA聚合酶的热启动改造与修饰 | 第20-21页 |
| 2.7 提高Taq DNA聚合酶对PCR抑制剂的耐受程度 | 第21-22页 |
| 第三节 本课题的研究目的及意义 | 第22-23页 |
| 参考文献 | 第23-28页 |
| 第二章 Taq DNA聚合酶的修饰及纯化 | 第28-57页 |
| 第一节 引言 | 第28-29页 |
| 第二节 实验材料与方法 | 第29-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第29页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.3 主要生化试剂 | 第30-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 2.2.1 Taq DNA聚合酶的基因工程改造 | 第32-33页 |
| 2.2.2 KT-C3 DNA聚合酶的表达与纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.3 KT-C3 DNA聚合酶的活性单位测定 | 第34-36页 |
| 2.2.4 KT-C3 DNA聚合酶的化学修饰 | 第36-40页 |
| 第三节 实验结果 | 第40-52页 |
| 3.1 KT-C3 DNA聚合酶与Taq DNA聚合酶基因序列对比 | 第40-41页 |
| 3.2 KT-C3 DNA聚合酶的外切酶活性检测 | 第41-42页 |
| 3.3 KT-C3 DNA聚合酶的表达与纯化 | 第42-44页 |
| 3.3.1 KT-C3 DNA聚合酶的小量表达与验证 | 第42-43页 |
| 3.3.2 KT-C3 DNA聚合酶的大量纯化 | 第43-44页 |
| 3.4 KT-C3 DNA聚合酶的活性单位测定 | 第44-49页 |
| 3.5 KT-C3 DNA聚合酶的化学修饰 | 第49-52页 |
| 3.5.1 优化化学修饰的反应温度 | 第50页 |
| 3.5.2 优化化学修饰的pH值 | 第50-51页 |
| 3 5.3 KT-C3 DNA聚合酶化学修饰与商品热启动酶的热启动效果对比 | 第51-52页 |
| 第四节 讨论 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第三章 KT-C3 DNA聚合酶的活性表征 | 第57-79页 |
| 第一节 引言 | 第57-59页 |
| 1.1 在实时PCR体系中的应用 | 第57页 |
| 1.2 在扩增全血和土壤样品中的应用 | 第57-58页 |
| 1.3 不同抑制剂对Taq DNA聚合酶的影响 | 第58-59页 |
| 第二节 实验材料与方法 | 第59-65页 |
| 2.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第59页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第59-60页 |
| 2.1.3 主要生化试剂 | 第60-61页 |
| 2.2 实验方法 | 第61-65页 |
| 2.2.1 KT-C3 DNA聚合酶的耐热性考察 | 第61页 |
| 2.2.2 KT-C3 DNA延伸温度考察 | 第61-62页 |
| 2.2.3 KT-C3 DNA聚合酶聚合酶活性考察 | 第62页 |
| 2.2.4 KT-C3 DNA聚合酶对PCR抑制剂耐受能力考察 | 第62-63页 |
| 2.2.5 KT-C3 DNA聚合酶在全血PCR中的扩增情况考察 | 第63-64页 |
| 2.2.6 KT-C3 DNA聚合酶在土壤提取物PCR中的扩增情况考察 | 第64-65页 |
| 第三节 实验结果 | 第65-75页 |
| 3.1 KT-C3 DNA聚合酶的耐热性考察 | 第65-66页 |
| 3.2 KT-C3 DNA聚合酶延伸温度考察 | 第66-67页 |
| 3.3 KT-C3 DNA聚合酶聚合酶活性考察 | 第67-68页 |
| 3.4 KT-C3 DNA聚合酶对PCR抑制剂耐受能力考察 | 第68-71页 |
| 3.4.1 KT-C3 DNA聚合酶耐受乙醇考察 | 第68-69页 |
| 3.4.2 KT-C3 DNA聚合酶耐受SDS考察 | 第69-70页 |
| 3.4.3 KT-C3 DNA聚合酶耐受NaCl考察 | 第70-71页 |
| 3.5 KT-C3 DNA聚合酶在全血PCR中的扩增性能考察 | 第71-73页 |
| 3.5.1 KT-C3 DNA聚合酶对全血的耐受程度考察 | 第71-72页 |
| 3.5.2 KT-C3 DNA聚合酶在全血中的扩增灵敏度考察 | 第72-73页 |
| 3.6 KT-C3 DNA聚合酶在土壤提取物PCR中的扩增性能考察 | 第73-75页 |
| 3.6.1 KT-C3 DNA聚合酶对土壤提取物的耐受程度考察 | 第73-74页 |
| 3.6.2 KT-C3 DNA聚合酶在土壤提取物中的扩增灵敏度考察 | 第74-75页 |
| 第四节 讨论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 总结与展望 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 附录Ⅰ | 第81-82页 |
| 附录Ⅱ | 第82-83页 |
