| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 1.1 豆科植物与根瘤菌之间的共生作用 | 第12-13页 |
| 1.1.1 根瘤形成的分子机制 | 第12-13页 |
| 1.1.2 根瘤的类型 | 第13页 |
| 1.2 乙烯在共生根瘤形成中的作用 | 第13-16页 |
| 1.2.1 植物中的乙烯信号通路 | 第13-15页 |
| 1.2.2 乙烯对豆科植物共生结瘤的影响 | 第15-16页 |
| 1.3 植物中铜离子的运输 | 第16-19页 |
| 1.3.1 重金属转运蛋白(HeavyMetalP-TypeATPase,HMA) | 第16-17页 |
| 1.3.2 铜及其他金属离子在根瘤形成中的作用及其转运 | 第17-18页 |
| 1.3.3 HMA7与铜转运 | 第18-19页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第19页 |
| 1.5 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 目的基因的筛选与表达模式分析 | 第20-27页 |
| 2.1 引言 | 第20页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第20页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第20页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第20页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第20页 |
| 2.3 实验方法 | 第20-23页 |
| 2.3.1 系统发育树的构建 | 第20页 |
| 2.3.2 目的基因的表达模式分析 | 第20-22页 |
| 2.3.3 荧光定量PCR引物设计及实验方法 | 第22-23页 |
| 2.4 结果与分析 | 第23-26页 |
| 2.4.1 蒺藜苜蓿HMA7基因的筛选与序列分析 | 第23页 |
| 2.4.2 样品总RNA的质量检测 | 第23-24页 |
| 2.4.3 目的基因在接菌与不接菌条件下的表达情况 | 第24页 |
| 2.4.4 目的基因在不同组织部位的表达情况 | 第24-25页 |
| 2.4.5 目的基因在不同铜浓度处理下的表达情况 | 第25-26页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 MTR_2g035840基因的表达定位分析 | 第27-41页 |
| 3.1 引言 | 第27页 |
| 3.2 实验材料、试剂和仪器 | 第27-28页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第28页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第28页 |
| 3.3 实验方法 | 第28-35页 |
| 3.3.1 红色荧光标记高尔基体基因载体的构建 | 第28-31页 |
| 3.3.2 MTR_2g035840亚细胞定位载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.3 MTR_2g035840启动子定位载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.3.4 重组质粒电转化农杆菌GV3101和Arqua | 第33页 |
| 3.3.5 烟草瞬时转化 | 第33-34页 |
| 3.3.6 蒺藜苜蓿转化体系的建立 | 第34页 |
| 3.3.7 GUS组织染色 | 第34-35页 |
| 3.4 结果与分析 | 第35-40页 |
| 3.4.1 GmMAN1-mCherry亚细胞定位载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.4.2 目的基因亚细胞定位载体的构建 | 第36-38页 |
| 3.4.3 启动子融合表达载体的构建 | 第38页 |
| 3.4.4 MTR_2g035840亚细胞定位结果 | 第38-39页 |
| 3.4.5 启动子定位结果 | 第39-40页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第四章 目的基因的RNA沉默和过表达 | 第41-66页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 实验材料、试剂和仪器 | 第41页 |
| 4.3 实验方法 | 第41-46页 |
| 4.3.1 RNAi载体的构建 | 第41-43页 |
| 4.3.2 过量表达载体的构建 | 第43页 |
| 4.3.3 重组质粒电转化发根农杆菌Arqual | 第43页 |
| 4.3.4 蒺藜苜蓿的转化体系 | 第43页 |
| 4.3.5 实验结果鉴定 | 第43-44页 |
| 4.3.6 MTR_2g035840和MTR_4g094695基因表达分析 | 第44-45页 |
| 4.3.7 乙烯信号通路相关基因表达分析 | 第45-46页 |
| 4.3.8 根瘤透射电镜样品的制作及观察 | 第46页 |
| 4.4 结果与分析 | 第46-64页 |
| 4.4.1 目的基因的扩增结果 | 第46页 |
| 4.4.2 RNAi载体的构建 | 第46-48页 |
| 4.4.3 过量表达载体的构建 | 第48页 |
| 4.4.4 转化苗植株表型观察 | 第48-50页 |
| 4.4.5 干扰及过表达效率检测 | 第50-53页 |
| 4.4.6 RNAi转化苗植株表型和根瘤的形态 | 第53-60页 |
| 4.4.7 过表达转化苗植株表型和根瘤的形态 | 第60-64页 |
| 4.5 小结与讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 5.1 结论 | 第66页 |
| 5.2 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 1 | 第76-79页 |
| 附录 2 | 第79-81页 |
| 附录 3 | 第81-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 作者简介 | 第87页 |
