| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 鹅细小病毒病概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 新型鹅细小病毒 | 第12-13页 |
| 1.2 鹅细小病毒的病原研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2.1 GPV的分类地位 | 第13页 |
| 1.2.2 GPV的培养特性 | 第13页 |
| 1.2.3 GPV的形态特征及理化特性 | 第13-14页 |
| 1.2.4 GPV基因组结构特点 | 第14页 |
| 1.3 GPV的非结构蛋白与结构蛋白 | 第14-16页 |
| 1.3.1 GPV的非结构蛋白 | 第14-15页 |
| 1.3.2 GPV的结构蛋白 | 第15-16页 |
| 1.4 GPV临床症状及病理变化 | 第16页 |
| 1.5 GPV检测方法研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5.1 病毒的分离 | 第16页 |
| 1.5.2 PCR检测方法 | 第16-17页 |
| 1.5.3 血清学诊断方法 | 第17-18页 |
| 1.6 GPV与NGPV的防治 | 第18页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-35页 |
| 2.1 材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 毒株与疫苗 | 第19页 |
| 2.1.2 菌种和质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.5 试验中配制的试剂 | 第19-23页 |
| 2.2 方法 | 第23-35页 |
| 2.2.1 NGPV分离鉴定 | 第23-27页 |
| 2.2.2 NGPVVP1和VP3蛋白表达 | 第27-32页 |
| 2.2.3 NGPV间接ELISA检测方法的建立与应用 | 第32-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-48页 |
| 3.1 NGPV分离鉴定 | 第35页 |
| 3.2 NGPVVP1和VP3蛋白表达结果 | 第35-41页 |
| 3.2.1 目的基因PCR扩增 | 第35-36页 |
| 3.2.2 阳性质粒的双酶切鉴定结果 | 第36-37页 |
| 3.2.3 原核重组表达质粒的构建 | 第37页 |
| 3.2.4 重组表达质粒阳性的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.2.5 阳性克隆序列测定 | 第38页 |
| 3.2.6 SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| 3.2.7 目的蛋白的纯化 | 第39页 |
| 3.2.8 Westernblot鉴定分析 | 第39-41页 |
| 3.3 间接ELISA检测方法的建立 | 第41-48页 |
| 3.3.1 蛋白浓度测定 | 第41页 |
| 3.3.2 包被抗原的选择 | 第41-42页 |
| 3.3.3 抗原最适包被浓度和抗体最佳稀释度的确定 | 第42页 |
| 3.3.4 封闭液的确定 | 第42页 |
| 3.3.5 最优封闭时间选择 | 第42-43页 |
| 3.3.6 最佳血清孵育时间的确定 | 第43页 |
| 3.3.7 二抗最佳稀释度选择 | 第43-44页 |
| 3.3.8 底物最佳反应时间的确定 | 第44页 |
| 3.3.9 间接ELISA方法的判断标准的确定 | 第44-45页 |
| 3.3.10 特异性检验 | 第45页 |
| 3.3.11 重复性试验结果 | 第45-47页 |
| 3.3.12 符合性检验 | 第47页 |
| 3.3.13 临床样品检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| 4.1 检测新型鹅细小病毒抗体的间接ELISA方法的优点 | 第48页 |
| 4.2 NGPV蛋白的表达纯化 | 第48-49页 |
| 4.3 NGPVELISA检测方法的建立 | 第49页 |
| 4.4 NGPV抗体ELISA检测方法的应用 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
