| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第10-22页 |
| 1.1 氧化葡萄酸杆菌 | 第10-11页 |
| 1.2 双组分系统 | 第11-18页 |
| 1.2.1 双组分系统的结构与功能 | 第11-13页 |
| 1.2.2 双组分磷酸转移系统中的信号途径 | 第13-15页 |
| 1.2.3 抗菌药物治疗的目标 | 第15-16页 |
| 1.2.4 双组分系统在真核生物与原核生物中的区别 | 第16-17页 |
| 1.2.5 氧化葡萄酸杆菌中的双组分蛋白HK(组氨酸激酶应答调节子杂合蛋白) | 第17-18页 |
| 1.3 蛋白质相互作用及研究方法 | 第18-20页 |
| 1.3.1 酵母双杂交 | 第18-19页 |
| 1.3.2 GST pull down | 第19页 |
| 1.3.3 双分子荧光互补实验技术 | 第19-20页 |
| 1.4 2-脱氢-3-脱氧庚糖酸醛缩酶(KD08PS) | 第20页 |
| 1.5 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸合酶(DXS) | 第20-21页 |
| 1.6 课题的研究意义及内容 | 第21-22页 |
| 第2章 酵母双杂交实验与验证 | 第22-41页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.1 实验菌株与质粒 | 第22页 |
| 2.1.2 实验材料与仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 实验配方 | 第23-24页 |
| 2.2.1 培养基配方 | 第23-24页 |
| 2.2.2 试剂配方 | 第24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 PCR目的片段的扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.2 菌落PCR | 第25页 |
| 2.3.3 质粒的抽提方法 | 第25-27页 |
| 2.3.4 DNA纯化方法 | 第27页 |
| 2.3.5 质粒胶回收 | 第27-28页 |
| 2.3.6 转化方法 | 第28-29页 |
| 2.4 实验步骤 | 第29-35页 |
| 2.4.1 对照实验 | 第29-30页 |
| 2.4.2 自激活检测实验 | 第30-33页 |
| 2.4.3 酵母双杂交的筛选 | 第33-34页 |
| 2.4.4 返回验证蛋白相互作用 | 第34-35页 |
| 2.5 实验结果 | 第35-41页 |
| 2.5.1 对照实验的实验结果 | 第35-37页 |
| 2.5.2 自激活实验结果 | 第37页 |
| 2.5.3 酵母双杂交的筛选结果 | 第37-39页 |
| 2.5.4 返回验证的实验结果 | 第39-41页 |
| 第3章 蛋白相互作用的体外验证 | 第41-53页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第41-42页 |
| 3.1.1 实验菌株与质粒 | 第41页 |
| 3.1.2 实验材料与仪器 | 第41-42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-45页 |
| 3.2.1 蛋白纯化 | 第42-43页 |
| 3.2.2 包涵体处理方法 | 第43-44页 |
| 3.2.3 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第44-45页 |
| 3.2.4 Bradford测蛋白质浓度 | 第45页 |
| 3.3 实验步骤 | 第45-49页 |
| 3.3.1 融合蛋白的质粒构建 | 第45-46页 |
| 3.3.2 融合蛋白质的诱导表达 | 第46-47页 |
| 3.3.3 GST pull down实验步骤 | 第47-48页 |
| 3.3.4 HK蛋白自磷酸化的GST pull down实验步骤 | 第48-49页 |
| 3.4 实验结果 | 第49-53页 |
| 3.4.1 融合蛋白诱导表达结果 | 第49页 |
| 3.4.2 GST pull down实验结果 | 第49-51页 |
| 3.4.3 HK蛋白自磷酸化的GST pull down实验结果 | 第51-53页 |
| 第4章 体内验证蛋白质的相互作用(BIFC) | 第53-61页 |
| 4.1 融合蛋白质粒的构建 | 第53-56页 |
| 4.2 双分子荧光互补实验 | 第56-57页 |
| 4.3 双分子荧光互补实验结果 | 第57-61页 |
| 第5章 总结与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 总结 | 第61页 |
| 5.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 硕士在读期间撰写的论文和专利 | 第73页 |
