| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第14-25页 |
| 1.1 国内外农业环境现状 | 第14-15页 |
| 1.2 植物抵抗铝毒的两种机制 | 第15-16页 |
| 1.2.1 植物抵抗铝毒内部耐受机制 | 第15页 |
| 1.2.2 植物抵抗铝毒外部排斥机制 | 第15-16页 |
| 1.3 植物抵抗铝毒研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 铝诱导植物分泌有机酸的两种模式 | 第16-17页 |
| 1.3.2 有机酸缓解铝作用 | 第17-18页 |
| 1.4 通过分子育种解决植物铝耐受性问题 | 第18-23页 |
| 1.4.1 对锌指蛋白STOP1的研究 | 第19-22页 |
| 1.4.2 对转运蛋白AtALMT1表达的研究 | 第22页 |
| 1.4.3 Al激活柠檬酸和苹果酸转运蛋白赋予拟南芥耐A1性的研究 | 第22-23页 |
| 1.4.4 在烟草中过表达AtMGT1赋予拟南芥耐Al性的研究 | 第23页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第23-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-43页 |
| 2.1 材料 | 第25-29页 |
| 2.1.1 植物材料及培养 | 第25页 |
| 2.1.2 菌株及质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.4 主要培养基 | 第26-28页 |
| 2.1.5 抗生素及其他试剂 | 第28-29页 |
| 2.1.6 主要使用仪器 | 第29页 |
| 2.2. 实验方法 | 第29-43页 |
| 2.2.1 引物合成 | 第29-30页 |
| 2.2.2. 植物总RNA提取及RT-PCR | 第30-31页 |
| 2.2.3 PCR反应体系 | 第31-33页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第33页 |
| 2.2.5 DNA片段的回收 | 第33页 |
| 2.2.6 DNA浓缩(乙醇沉淀法) | 第33-34页 |
| 2.2.7 质粒DNA的转化方法 | 第34页 |
| 2.2.8 E.coli感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.9 PCR产物的T/A克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.10 DNA片段的连接 | 第36页 |
| 2.2.11 E.coli感受态大肠杆菌细胞的化学转化 | 第36页 |
| 2.2.12 限制性核酸内切酶消化DNA反应体系 | 第36-37页 |
| 2.2.13 Gateway LR反应体系 | 第37页 |
| 2.2.14 农杆菌感受态细胞(电转化用)的制备 | 第37-38页 |
| 2.2.15 电击转化农杆菌感受态细胞程序 | 第38页 |
| 2.2.16 菌落PCR | 第38-39页 |
| 2.2.17 植物遗传转化(农杆菌介导法) | 第39页 |
| 2.2.18 植物基因组提取 | 第39-40页 |
| 2.2.19 质粒的提取方法 | 第40-41页 |
| 2.2.20 植物根尖苹果酸含量及分泌量的测定 | 第41-42页 |
| 2.2.21 根相对伸长量的测定 | 第42-43页 |
| 第三章 结果与分析 | 第43-68页 |
| 3.1 植物表达载体的构建 | 第43-55页 |
| 3.1.1 GW3.0-STOP1-AtMGT1植物表达载体的构建策略 | 第43页 |
| 3.1.2 pMD18-T-STOP1 TA克隆载体的构建 | 第43-45页 |
| 3.1.3 入门载体pENTR-2B-STOP1的构建 | 第45-46页 |
| 3.1.4 通过LR反应构建植物表达载体GW3.0-STOP1-AtMGT1 | 第46-47页 |
| 3.1.5 植物表达载体GW3.0-STOP1-AtMGT1转烟草 | 第47-48页 |
| 3.1.5.1 电转法转化质粒GW3.0-STOP1-AtMGT1 | 第47页 |
| 3.1.5.2 农杆菌介导的转基因烟草 | 第47-48页 |
| 3.1.5.3 外植体培育 | 第48页 |
| 3.1.6 PCR检测目的基因在烟草中的整合情况 | 第48-49页 |
| 3.1.7 植物表达载体pH7GW2.0--STOP1的构建策 | 第49-50页 |
| 3.1.8 通过LR反应得到植物表达载体pH7GW2.0-STOP1 | 第50-51页 |
| 3.1.9 PCR检测目的基因在烟草中的整合情况 | 第51-52页 |
| 3.1.10 植物表达载体载体Pk2GW7-AtMGTI构建策略 | 第52-53页 |
| 3.1.11 通过LR反应构建植物表达载体pk2gw7-AtMGT1 | 第53-54页 |
| 3.1.12 转基因植株对铝的抗性比较 | 第54-55页 |
| 3.2 大黄豆丹波黑大豆STOP1基因各种生理生化指标的测定 | 第55-68页 |
| 3.2.1 RT-PCR半定量分析在STOP1基因表达情况 | 第55-56页 |
| 3.2.2 大黄豆大黑豆根尖苹果酸分泌量的测定 | 第56-60页 |
| 3.2.3 大黄豆、丹波黑大豆、小黄豆、小黑豆STOP1基因序列比 | 第60-68页 |
| 第四章 讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 总结和展望 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 附录 | 第76页 |
