| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·西维因农药残留检测技术简介 | 第8-10页 |
| ·西维因简介 | 第8页 |
| ·西维因的应用及残留危害 | 第8-9页 |
| ·西维因残留检测方法 | 第9-10页 |
| ·单链抗体技术研究进展 | 第10-18页 |
| ·抗体简介 | 第10-11页 |
| ·抗体工程简介 | 第11-12页 |
| ·基因工程抗体分类 | 第12-14页 |
| ·单链抗体(single-chain Fv,scFv) | 第14-16页 |
| ·scFv制备技术分类 | 第16-18页 |
| ·scFv的应用 | 第18页 |
| ·单链抗体应用前景展望 | 第18页 |
| ·研究目的及意义 | 第18-19页 |
| ·研究内容 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-36页 |
| ·实验材料 | 第20-24页 |
| ·质粒、菌株及细胞株 | 第20页 |
| ·主要试剂、溶液及培养基 | 第20-23页 |
| ·实验仪器 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-36页 |
| ·V_L、V_H克隆及测序鉴定 | 第24-26页 |
| ·scFv基因片段克隆 | 第26-28页 |
| ·重组表达载体构建与诱导表达 | 第28-29页 |
| ·包涵体复性的条件优化 | 第29-30页 |
| ·scFv纯化与活性鉴定 | 第30-31页 |
| ·svFv可溶性表达 | 第31-36页 |
| 3 结果与讨论 | 第36-51页 |
| ·V_L、V_H克隆及测序鉴定 | 第36-39页 |
| ·从西维因杂交瘤细胞中提取总RNA | 第36页 |
| ·轻重链可变区基因扩增 | 第36-37页 |
| ·阳性重组子筛选 | 第37-38页 |
| ·测序结果分析及鉴定 | 第38-39页 |
| ·scFv基因片段克隆 | 第39-40页 |
| ·重组表达载体构建及测序验证 | 第40-41页 |
| ·重组表达 | 第41-42页 |
| ·复性条件优化 | 第42-44页 |
| ·复性方法的确定 | 第42页 |
| ·复性时间的优化 | 第42-43页 |
| ·复性蛋白起始浓度的优化 | 第43页 |
| ·复性液组成成分进行的优化 | 第43-44页 |
| ·复性蛋白纯化及活力测定 | 第44-46页 |
| ·复性蛋白纯化 | 第44-45页 |
| ·直接竞争ELISA验证复性抗体活性 | 第45-46页 |
| ·scFv的可溶性表达 | 第46-51页 |
| ·scFv-pET26b重组质粒的构建及可溶性表达 | 第46-48页 |
| ·OPH-scFv-pET26b可溶性表达质粒构建及可溶性表达 | 第48-51页 |
| 4 结论 | 第51-52页 |
| 5 展望 | 第52-53页 |
| 6 参考文献 | 第53-61页 |
| 7 硕士期间发表论文情况 | 第61-62页 |
| 8 致谢 | 第62页 |
