| 缩略语表 | 第5-7页 |
| 中文摘要 | 第7-12页 |
| Abstract | 第12-17页 |
| 前言 | 第18-20页 |
| 文献回顾 | 第20-33页 |
| 第一部分 HCV 多表位肽的设计合成及其诱导 HHD-2 小鼠的免疫应答 | 第33-50页 |
| 1 材料 | 第33-36页 |
| 1.1 细胞系和多肽 | 第33-34页 |
| 1.2 培养基 | 第34页 |
| 1.3 动物 | 第34-35页 |
| 1.4 主要试剂 | 第35页 |
| 1.5 主要仪器和器材 | 第35-36页 |
| 2 实验方法 | 第36-40页 |
| 2.1 HCV 多肽对小鼠的免疫 | 第36页 |
| 2.2 免疫小鼠脾淋巴细胞悬液的制备 | 第36页 |
| 2.3 脾细胞增殖实验 | 第36页 |
| 2.4 流式细胞仪检测免疫小鼠 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞百分比 | 第36-37页 |
| 2.5 ELISpot 检测免疫小鼠细胞因子 IFN-γ、IL-2 及 IL-4 | 第37页 |
| 2.6 CTL 杀伤实验 | 第37-38页 |
| 2.7 多肽与 HLA-A*0201 相对亲和力和稳定性检测 | 第38-39页 |
| 2.8 ELISpot 检测 HCV 感染者 PBMC 中分泌 IFN-γ的细胞数 | 第39页 |
| 2.9 统计学处理 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-46页 |
| 3.1 多表位肽刺激各免疫组小鼠脾细胞增殖实验的结果 | 第40页 |
| 3.2 各免疫组小鼠 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞百分比检测结果 | 第40-42页 |
| 3.3 各免疫组小鼠细胞因子的检测结果 | 第42-44页 |
| 3.4 各免疫组小鼠的 CTL 杀伤实验结果 | 第44-45页 |
| 3.5 多肽与 HLA-A*0201 分子亲和力与稳定性的检测结果 | 第45-46页 |
| 3.6 HCV 感染患者 PBMC 分泌 IFN-γ的检测结果 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 第二部分 EDA-ΔNS3-VAL-44 重组蛋白的制备及其诱导的免疫应答 | 第50-85页 |
| 1 材料 | 第50-53页 |
| 1.1 菌株和载体 | 第50页 |
| 1.2 细胞株与动物 | 第50页 |
| 1.3 培养基 | 第50-51页 |
| 1.4 主要试剂 | 第51-52页 |
| 1.5 常用缓冲液系统 | 第52页 |
| 1.6 主要仪器 | 第52-53页 |
| 2 实验方法 | 第53-62页 |
| 2.1 E.coli DH5α感受态细胞的制备 | 第53页 |
| 2.2 重组基因 EDA-NS3-VAL-44 载体的酶切鉴定与序列测定 | 第53-54页 |
| 2.3 引物设计与合成 | 第54页 |
| 2.4 EDA、EDA-ΔNS3、ΔNS3 目的基因片段的扩增及鉴定 | 第54-55页 |
| 2.5 目的基因片段与载体的连接和转化 | 第55-56页 |
| 2.6 重组基因的原核表达、纯化及鉴定 | 第56-57页 |
| 2.7 大量提取 pIRES2-dsRED-EDA-ΔNS3-VAL-44 质粒 | 第57页 |
| 2.8 pIRES2-dsRED-EDA-ΔNS3-VAL-44 质粒稳定转染 C1R.AAD 细胞系的建立 | 第57-60页 |
| 2.9 纯化重组蛋白对小鼠的免疫 | 第60页 |
| 2.10 实时定量 PCR 检测免疫小鼠肝脏中 EDA-ΔNS3-VAL-44 的 mRNA | 第60-61页 |
| 2.11 免疫小鼠血清抗体的检测 | 第61-62页 |
| 2.12 免疫小鼠脾淋巴细胞悬液的制备 | 第62页 |
| 2.13 脾细胞增殖实验 | 第62页 |
| 2.14 流式细胞仪检测免疫小鼠 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞百分比 | 第62页 |
| 2.15 ELISpot 检测免疫小鼠细胞因子 IFN-γ、IL-2 及 IL-4 | 第62页 |
| 2.16 CTL 杀伤实验 | 第62页 |
| 3 结果 | 第62-81页 |
| 3.1 EDA、EDA-ΔNS3、ΔNS3、EDA-ΔNS3-VAL-44 基因的扩增和载体构建结果 | 第62-65页 |
| 3.2 目的蛋白的诱导表达、纯化及鉴定 | 第65-71页 |
| 3.3 EDA-ΔNS3-VAL-44 质粒稳定转染 C1R.AAD 细胞的鉴定结果 | 第71-73页 |
| 3.4 各免疫组小鼠体液免疫应答检测结果 | 第73-74页 |
| 3.5 各免疫组小鼠细胞免疫应答的检测结果 | 第74-81页 |
| 4 讨论 | 第81-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-100页 |
| 附录 | 第100-101页 |
