| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-12页 |
| 2 材料与方法 | 第12-24页 |
| 2.1 主要仪器设备与试剂 | 第12页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第12页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第12页 |
| 2.2 试验材料 | 第12-13页 |
| 2.3 小麦 cDNA 的制备 | 第13-14页 |
| 2.3.1 总 RNA 的提取 | 第13页 |
| 2.3.2 总 RNA 中基因组 DNA 的去除 | 第13-14页 |
| 2.3.3 总 RNA 浓度、纯度及完整性检测 | 第14页 |
| 2.3.4 cDNA 的合成 | 第14页 |
| 2.4 重组 TaATG8 基因的表达和鉴定 | 第14-18页 |
| 2.4.1 PCR 扩增 TaATG8 基因的全长 | 第14-15页 |
| 2.4.2 PCR 扩增产物的凝胶回收 | 第15页 |
| 2.4.3 PCR 产物的载体连接反应 | 第15-16页 |
| 2.4.4 CaCl_2法制备大肠杆菌 E.coli DH5α的感受态细胞 | 第16页 |
| 2.4.5 连接产物的转化 | 第16页 |
| 2.4.6 重组质粒的筛选与鉴定 | 第16页 |
| 2.4.7 测序及与原始序列的比较 | 第16页 |
| 2.4.8 重组小麦 ATG8 的诱导表达 | 第16-17页 |
| 2.4.9 SDS-PAGE 检测目的蛋白的表达 | 第17-18页 |
| 2.5 重组小麦 ATG8 的抗体制备 | 第18-19页 |
| 2.5.1 重组小麦 ATG8 的纯化 | 第18页 |
| 2.5.2 兔抗 ATG8 抗血清制备 | 第18页 |
| 2.5.3 Western 印迹检测 ATG8 抗血清的特异性 | 第18-19页 |
| 2.6 实时定量 PCR（real time quantitative PCR,RT- qPCR）检测 TaATG8 基因表达 | 第19-20页 |
| 2.7 小麦–叶锈菌互作过程中 TaATG8 的 Western Blotting 检测 | 第20页 |
| 2.7.1 小麦接种与取样 | 第20页 |
| 2.7.2 小麦样品中总的可溶性蛋白的提取 | 第20页 |
| 2.7.3 小麦样品中 ATG8 蛋白表达量的变化 | 第20页 |
| 2.8 BSMV 载体构建 | 第20页 |
| 2.9 VIGS 体外转录产物的获得及转染 | 第20-23页 |
| 2.9.1 BSMV 质粒提取 | 第20-21页 |
| 2.9.2 BSMV 线性化 | 第21页 |
| 2.9.3 纯化回收 | 第21页 |
| 2.9.4 体外转录与转染 | 第21-23页 |
| 2.10 基因沉默后的验证以及 HR 荧光染色检测 TaATG8 基因功能 | 第23-24页 |
| 2.10.1 基因沉默后的验证 | 第23页 |
| 2.10.2 HR 荧光染色探讨 TaATG8 基因功能 | 第23-24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-35页 |
| 3.1 RT-PCR 克隆 TaATG8 基因 | 第24页 |
| 3.2 ATG8 的原核表达及抗血清获得 | 第24-28页 |
| 3.2.1 小麦自噬相关蛋白 ATG8 的原核表达 | 第24-27页 |
| 3.2.2 兔抗重组蛋白 TaATG8 血清的制备和特异性鉴定 | 第27-28页 |
| 3.3 小麦–叶锈菌互作过程中小麦自噬相关基因 TaATG8 的实时定量检测 | 第28-29页 |
| 3.4 小麦叶片接种叶锈菌后不同时间点 TaATG8 基因在翻译水平的表达 | 第29-30页 |
| 3.5 VIGS 技术验证自噬对 HR-PCD 的影响 | 第30-35页 |
| 3.5.1 TaATG8 基因的 VIGS 载体构建和体外转录 | 第30-32页 |
| 3.5.2 基因沉默后的验证 | 第32-33页 |
| 3.5.3 TaATG8 基因沉默对 HR-PCD 的影响 | 第33-35页 |
| 4 讨论 | 第35-39页 |
| 4.1 检测自噬体膜特异性蛋白 ATG8 时需考虑的因素 | 第35页 |
| 4.2 细胞自噬保护细胞免于死亡 | 第35-36页 |
| 4.3 细胞自噬促进细胞的死亡 | 第36-37页 |
| 4.4 展望 | 第37-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 在读期间已发表论文 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
