| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-39页 |
| 1 课题的提出 | 第14页 |
| 2 前人研究进展 | 第14-37页 |
| 2.1 MYB转录因子的研究进展 | 第14-20页 |
| 2.1.1 MYB转录因子的结构特征及分类 | 第14-15页 |
| 2.1.2 MYB转录因子的起源及进化 | 第15-16页 |
| 2.1.3 MYB转录因子的生物学功能 | 第16-18页 |
| 2.1.4 MYB转录因子的调控机理 | 第18-20页 |
| 2.2 果树作物中MYB转录因子研究进展 | 第20-28页 |
| 2.3 植物中苯丙烷代谢研究进展 | 第28-37页 |
| 2.3.1 植物中苯丙烷类代谢物的功能及合成 | 第28-32页 |
| 2.3.2 植物中苯丙烷类代谢的调控 | 第32-34页 |
| 2.3.3 柑橘中的苯丙烷代谢研究进展 | 第34-37页 |
| 3 本研究的目的和内容 | 第37-39页 |
| 第二章 甜橙R2R3-MYB转录因子家族的全基因组分析 | 第39-61页 |
| 1 引言 | 第39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-41页 |
| 2.1 植物材料及外源处理 | 第39页 |
| 2.2 甜橙中MYB蛋白的鉴定和序列分析 | 第39-40页 |
| 2.3 甜橙中MYB蛋白的染色体分布及复制情况分析 | 第40页 |
| 2.4 MYB蛋白的分类及系统进化树的构建 | 第40-41页 |
| 2.5 甜橙MYB基因的表达分析 | 第41页 |
| 2.6 RNA提取及定量PCR | 第41页 |
| 3 结果 | 第41-58页 |
| 3.1 100 个甜橙MYB基因的鉴定及其序列特征 | 第41-43页 |
| 3.2 100 个甜橙MYB基因的染色体分布及基因复制情况 | 第43-45页 |
| 3.3 甜橙中MYB基因家族的分类及基因结构 | 第45-53页 |
| 3.4 甜橙中MYB基因的表达分析 | 第53-56页 |
| 3.5 甜橙中R2R3-MYB转录因子的功能预测 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 甜橙中MYB基因的进化特点 | 第58页 |
| 4.2 家族分析得到的候选MYB基因的功能预测及展望 | 第58-61页 |
| 第三章 候选基因CsMYBF1的功能鉴定及调控机理研究 | 第61-120页 |
| 1 引言 | 第61-62页 |
| 2 材料与方法 | 第62-73页 |
| 2.1 实验材料 | 第62-63页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第62页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第62-63页 |
| 2.2 实验方法 | 第63-73页 |
| 2.2.1 目的基因全长的克隆 | 第63页 |
| 2.2.2 RNA的提取及基因表达分析 | 第63页 |
| 2.2.3 CsMYBF1超量表达载体的构建 | 第63-64页 |
| 2.2.4 CsMYBF1干涉载体的构建 | 第64页 |
| 2.2.5 CsMYBF1亚细胞定位分析 | 第64-65页 |
| 2.2.6 目的蛋白的原核表达及蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| 2.2.7 目的基因拷贝数分析 | 第66页 |
| 2.2.8 CsMYBF1转录激活活性分析 | 第66页 |
| 2.2.9 农杆菌介导番茄的遗传转化 | 第66-67页 |
| 2.2.10 农杆菌介导柑橘愈伤的遗传转化 | 第67页 |
| 2.2.11 农杆菌介导山金柑的遗传转化 | 第67-68页 |
| 2.2.12 转基因番茄数字表达谱分析 | 第68页 |
| 2.2.13 次生代谢物的提取及测定 | 第68-69页 |
| 2.2.14 初生代谢物的提取及测定 | 第69页 |
| 2.2.15 愈伤组织的DPBA染色分析 | 第69页 |
| 2.2.16 烟草双荧光素酶瞬时表达分析 | 第69-71页 |
| 2.2.17 酵母单杂交实验 | 第71-72页 |
| 2.2.18 EMSA | 第72-73页 |
| 3 结果与分析 | 第73-110页 |
| 3.1 CsMYBF1基因序列及进化分析 | 第73-75页 |
| 3.2 CsMYBF1基因的表达分析 | 第75-76页 |
| 3.3 CsMYBF1基因的拷贝数分析 | 第76-77页 |
| 3.4 CsMYBF1的亚细胞定位 | 第77-78页 |
| 3.5 CsMYBF1重组蛋白的诱导及纯化 | 第78-80页 |
| 3.6 CsMYBF1的转录激活分析 | 第80-81页 |
| 3.7 CsMYBF1转基因番茄中代谢产物及基因表达分析 | 第81-90页 |
| 3.7.1 CsMYBF1转基因番茄植株的获得 | 第81-82页 |
| 3.7.2 CsMYBF1转基因番茄的次生代谢物分析 | 第82-86页 |
| 3.7.3 CsMYBF1转基因番茄的初生代谢物分析 | 第86-87页 |
| 3.7.4 CsMYBF1转基因番茄的数字表达谱分析 | 第87-90页 |
| 3.8 CsMYBF1柑橘愈伤干涉系中代谢产物及基因表达分析 | 第90-94页 |
| 3.8.1 转基因愈伤系的获得 | 第90-91页 |
| 3.8.2 转基因愈伤系的代谢产物分析 | 第91-93页 |
| 3.8.3 愈伤组织的DPBA染色分析 | 第93页 |
| 3.8.4 愈伤组织中苯丙烷途径结构基因表达分析 | 第93-94页 |
| 3.9 CsMYBF1山金柑干涉系中代谢产物及基因表达分析 | 第94-97页 |
| 3.9.1 山金柑干涉系的获得 | 第94-95页 |
| 3.9.2 山金柑干涉系的代谢产物分析 | 第95-97页 |
| 3.9.3 山金柑干涉系中苯丙烷途径结构基因表达分析 | 第97页 |
| 3.10 CsMYBF1激活番茄和柑橘中苯丙烷途径中结构基因的启动子 | 第97-100页 |
| 3.11 CsMYBF1可以激活苯丙烷途径基因启动子上的MYBPLANT顺式元件 | 第100-104页 |
| 3.12 CsMYBF1可以直接结合MYBPLANT顺式元件 | 第104-107页 |
| 3.13 CsMYBF1上游调控因子的寻找 | 第107-110页 |
| 4 讨论 | 第110-117页 |
| 4.1 CsMYBF1可以调控羟基肉桂酸和黄酮醇的合成 | 第110-111页 |
| 4.2 番茄中超量表达CsMYBF1在代谢水平的影响 | 第111-112页 |
| 4.3 番茄中超量表达CsMYBF1不诱导黄酮醇积累的可能的原因 | 第112-115页 |
| 4.4 CsMYBF1在柑橘苯丙烷代谢调控网络中可能的角色及作用 | 第115-117页 |
| 5 后续研究设想 | 第117-120页 |
| 参考文献 | 第120-134页 |
| 附录Ⅰ部分实验操作步骤 | 第134-136页 |
| 附录Ⅱ 转基因番茄果肉中LC-MS鉴定出的代谢产物的含量 | 第136-138页 |
| 附录Ⅲ 转基因柑橘愈伤组织中LC-MS鉴定出的代谢产物的含量 | 第138-139页 |
| 附录Ⅳ 本研究中所使用到的引物序列 | 第139-143页 |
| 附录Ⅴ 攻读博士期间发表的论文 | 第143-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
