| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 病原学及分子生物学 | 第13-15页 |
| 1.1.2 感染机制及病理变化 | 第15-16页 |
| 1.2 TNFα 概述 | 第16-20页 |
| 1.2.1 TNFα 生物学活性 | 第17-19页 |
| 1.2.2 TNFα 介导的细胞信号传导 | 第19-20页 |
| 1.3 ADAM17概述 | 第20-21页 |
| 1.3.1 ADAM17的剪切功能 | 第21页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 TNFα 在PRRSV感染中的作用 | 第23-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 毒株、细胞、实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 猪肺泡巨噬细胞的获取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 PRRSV体外感染PAMs | 第24页 |
| 2.2.3 ELISA方法检测TNFα | 第24-25页 |
| 2.2.4 真核表达质粒pcDNA3.1/TNFα 的构建与鉴定 | 第25-27页 |
| 2.2.5 构建能够分泌TNFα 的Marc-145细胞模型 | 第27-28页 |
| 2.2.6 检测Marc-145细胞模型中PRRSV感染情况 | 第28页 |
| 2.2.7 相对荧光定量PCR | 第28页 |
| 2.2.8 TCID_(50)测定 | 第28-29页 |
| 2.2.9 间接免疫荧光试验 | 第29页 |
| 2.2.10 数据分析 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-32页 |
| 2.3.1 PRRSV感染可促进PAMs分泌TNFα | 第29-30页 |
| 2.3.2 表达TNFα 的真核表达质粒的构建与鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.3 TNFα 可抑制PRRSV在Marc-145细胞中的感染增殖 | 第31-32页 |
| 2.4 讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 ADAM17对猪源TNFα 剪切作用的研究 | 第34-44页 |
| 3.1 实验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第34页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-37页 |
| 3.2.1 生物试剂对ADAM17活性进行调节 | 第34页 |
| 3.2.2 猪源TNFα 表达于HEK293细胞 | 第34-35页 |
| 3.2.3 过表达ADAM17 | 第35页 |
| 3.2.4 慢病毒包装系统敲除ADAM17基因 | 第35页 |
| 3.2.5 基因定点突变及缺失 | 第35-36页 |
| 3.2.6 流式细胞仪分选 | 第36页 |
| 3.2.7 免疫蛋白印迹 | 第36-37页 |
| 3.2.8 ELISA | 第37页 |
| 3.2.9 数据分析 | 第37页 |
| 3.3 实验结果 | 第37-42页 |
| 3.3.1 ADAM17介导PAMs分泌TNFα | 第37-38页 |
| 3.3.2 过表达ADAM17促进HEK293细胞分泌TNFα | 第38-39页 |
| 3.3.3 特异性敲低ADAM17的表达可抑制TNFα 的分泌 | 第39-40页 |
| 3.3.4 基因定点突变/缺失的真核表达质粒的构建与鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.5 ADAM17剪切猪源TNFα 关键域的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.4 讨论 | 第42-44页 |
| 第四章 全文结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简历 | 第55页 |
