| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文缩写对照 | 第9-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 核酸适配体与SELEX | 第13-16页 |
| 1.1.1 核酸适配体 | 第13-14页 |
| 1.1.2 SELEX | 第14-16页 |
| 1.2 核酸适配体在肿瘤研究中的应用 | 第16-19页 |
| 1.2.1 核酸适配体与肿瘤的靶向治疗 | 第16-18页 |
| 1.2.2 核酸适配体在肿瘤标志物的发现与检测中的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 本论文开展的工作 | 第19-21页 |
| 1.3.1 基于cell-SELEX筛选人胰腺导管腺癌细胞PL45的核酸适配体 | 第19页 |
| 1.3.2 人胰腺导管腺癌细胞系PL45核酸适配体靶标的寻找与鉴定 | 第19-21页 |
| 第2章 基于cell-SELEX筛选人胰腺导管腺癌细胞系PL45的核酸适配体 | 第21-35页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验部分 | 第22-30页 |
| 2.2.1 实验中用到的试剂、核酸序列、细胞系及仪器 | 第22-24页 |
| 2.2.2 设计文库与引物 | 第24-25页 |
| 2.2.3 优化PCR程序中的退火温度 | 第25页 |
| 2.2.4 实验中用到的细胞系及其培养 | 第25-26页 |
| 2.2.5 细胞和文库的准备 | 第26页 |
| 2.2.6 正向筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.7 反向筛选 | 第27-28页 |
| 2.2.8 制备ssDNA文库 | 第28页 |
| 2.2.9 筛选过程中筛选压力的调整及循环筛选 | 第28-29页 |
| 2.2.10 检测筛选进程 | 第29-30页 |
| 2.2.11 高通量测序 | 第30页 |
| 2.3 实验结果 | 第30-34页 |
| 2.3.1 PCR退火温度的优化 | 第30-31页 |
| 2.3.2 筛选文库的富集 | 第31页 |
| 2.3.3 富集文库的高通量测序及核酸适配体的明确 | 第31-33页 |
| 2.3.4 XQ-2与不同细胞系结合能力的分析 | 第33-34页 |
| 2.4 实验小结 | 第34-35页 |
| 第3章 XQ-2序列的优化修饰及初步应用 | 第35-49页 |
| 3.1 前言 | 第35页 |
| 3.2 实验部分 | 第35-42页 |
| 3.2.1 实验中用到的核酸序列、仪器和试剂 | 第35-37页 |
| 3.2.2 XQ-2序列的删减优化 | 第37-38页 |
| 3.2.3 核酸适配体亲和力的考察 | 第38页 |
| 3.2.4 核酸适配体的竞争性考察 | 第38-40页 |
| 3.2.5 温度对XQ-2d与PL45细胞结合能力的影响 | 第40页 |
| 3.2.6 核酸适配体稳定性的考察 | 第40-41页 |
| 3.2.7 核酸适配体在临床病理组织切片中的检测 | 第41-42页 |
| 3.2.8 核酸适配体在活体胰腺癌移植瘤中的成像 | 第42页 |
| 3.3 实验结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1 XQ-2序列的优化 | 第42-43页 |
| 3.3.2 核酸适配体的特点 | 第43-46页 |
| 3.3.3 核酸适配体在组织切片与肿瘤活体成像中的应用 | 第46-48页 |
| 3.4 实验小结 | 第48-49页 |
| 第4章 XQ-2d结合人胰腺导管腺癌细胞系PL45的靶标发现 | 第49-59页 |
| 4.1 前言 | 第49-50页 |
| 4.2 实验部分 | 第50-55页 |
| 4.2.1 核酸序列、试剂仪器与溶液配制 | 第50-52页 |
| 4.2.2 XQ-2d的靶标类型 | 第52-53页 |
| 4.2.3 收集膜蛋白样品 | 第53页 |
| 4.2.4 蛋白上样样品的制备 | 第53-54页 |
| 4.2.5 SDS-PAGE电泳 | 第54-55页 |
| 4.3 实验结果 | 第55-57页 |
| 4.3.1 XQ-2d的靶标类型分析 | 第55页 |
| 4.3.2 5'-T(6)-XQ-2d与PL45细胞结合的能力分析 | 第55-56页 |
| 4.3.3 质谱鉴定XQ-2d结合的蛋白质 | 第56-57页 |
| 4.4 实验小结 | 第57-59页 |
| 第5章 XQ-2d结合胰腺导管腺癌细胞系PL45的靶标鉴定 | 第59-72页 |
| 5.1 前言 | 第59页 |
| 5.2 实验部分 | 第59-67页 |
| 5.2.1 实验中所用到的仪器试剂以及核酸序列与溶液配制 | 第59-60页 |
| 5.2.2 XQ-2d-pull down实验 | 第60-61页 |
| 5.2.3 验证4条干扰序列的干扰效果 | 第61-63页 |
| 5.2.4 检测XQ-2d与有效干扰之后的PL45细胞的结合 | 第63-64页 |
| 5.2.5 XQ-2d与CD71蛋白的共定位 | 第64-65页 |
| 5.2.6 抗体的Kd值,抗体与XQ-2d的竞争性分析 | 第65-67页 |
| 5.3 实验结果 | 第67-71页 |
| 5.3.1 XQ-2d与CD71蛋白在人胰腺导管腺癌细胞PL45的定位分析 | 第67页 |
| 5.3.2 Aptamer-pull down检测XQ-2d结合的蛋白是CD71蛋白 | 第67-68页 |
| 5.3.3 干扰实验 | 第68-69页 |
| 5.3.4 XQ-2d与CD71抗体的竞争分析 | 第69-71页 |
| 5.4 实验小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
