| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 Nisin的结构及理化性质 | 第11-12页 |
| 1.2 Nisin的生物合成研究 | 第12-14页 |
| 1.3 Nisin生物合成有关基因的遗传分析 | 第14-17页 |
| 1.4 Nisin的抑菌机制 | 第17页 |
| 1.5 Nisin分子生物学及基因工程研究进展 | 第17-19页 |
| 1.6 Nisin研究的应用 | 第19-20页 |
| 1.7 选题意义、研究内容及目标 | 第20-22页 |
| 第二章 nisI的克隆及基因工程菌的构建 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料 | 第22-26页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第22页 |
| 2.2.2 培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.3 溶液 | 第23-24页 |
| 2.2.4 实验试剂 | 第24-26页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-31页 |
| 2.3.1 菌种培养及保藏 | 第26-27页 |
| 2.3.2 乳酸乳球菌基因组DNA的小量提取 | 第27页 |
| 2.3.3 碱裂解法提取大肠杆菌质粒 | 第27-28页 |
| 2.3.4 乳酸乳球菌质粒DNA的提取 | 第28页 |
| 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.3.6 乳酸乳球菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.7 nisin抗性基因nisI的扩增及TA克隆 | 第29页 |
| 2.3.8 构建pMG36e-NisI重组表达载体 | 第29-31页 |
| 2.3.9 乳酸乳球菌重组菌构建 | 第31页 |
| 2.3.10 乳酸乳球菌重组菌中质粒稳定性的检测 | 第31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-35页 |
| 2.4.1 Nisin抗性基因nisI的扩增 | 第31-33页 |
| 2.4.2 重组质粒pMD19-nisI的鉴定 | 第33页 |
| 2.4.3 质粒pMG36e及质粒pMD19-nisI的提取及酶切 | 第33-34页 |
| 2.4.4 重组质粒pMG36e-nisI的构建 | 第34-35页 |
| 2.4.5 乳酸乳球菌中重组质粒pMG36e-nisI的提取及酶切鉴定 | 第35页 |
| 2.4.6 乳酸乳球菌重组菌中质粒稳定性的检测 | 第35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 基因工程菌与原始菌株合成nisin的各基因的表达量的比较 | 第36-45页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1 菌种 | 第36-37页 |
| 3.2.2 培养基 | 第37页 |
| 3.2.3 实验药品与试剂 | 第37页 |
| 3.2.4 主要仪器与设备 | 第37页 |
| 3.2.5 溶液的配制 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.3.1 菌株的培养 | 第37-38页 |
| 3.3.2 引物的设计与合成 | 第38页 |
| 3.3.3 总RNA的提取 | 第38页 |
| 3.3.4 反转录反应 | 第38-39页 |
| 3.3.5 PCR扩增反应 | 第39页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第39-44页 |
| 3.4.1 总RNA浓度的检测与分析 | 第39-40页 |
| 3.4.2 荧光定量PCR的引物 | 第40-41页 |
| 3.4.3 与nisin合成相关基因的表达情况 | 第41-42页 |
| 3.4.4 原始菌株与重组菌LAB-pMG36e-nisI菌株中nisI的表达情况 | 第42-44页 |
| 3.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第四章 Nisin基因工程菌培养基培养条件的研究 | 第45-61页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45-47页 |
| 4.2.1 菌株 | 第45页 |
| 4.2.2 培养基 | 第45-46页 |
| 4.2.3 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4.3 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.3.1 种子液最佳培养时间 | 第47页 |
| 4.3.2 发酵培养基培养方法 | 第47页 |
| 4.3.3 Nisin效价的测定 | 第47页 |
| 4.3.4 不同发酵培养基对Nisin发酵的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.6 响应面优化培养基组成 | 第48-49页 |
| 4.3.7 验证试验 | 第49页 |
| 4.3.8 原始菌株在优化后培养基和培养条件下Nisin的产量 | 第49页 |
| 4.4 实验结果 | 第49-60页 |
| 4.4.1 种子生长曲线的确定 | 第49页 |
| 4.4.2 基础培养基对菌体生物量的影响 | 第49-50页 |
| 4.4.3 单因素条件的摸索 | 第50-56页 |
| 4.4.4 响应曲面 | 第56-60页 |
| 4.4.5 验证试验 | 第60页 |
| 4.4.6 原始菌株在优化后培养基和培养条件下Nisin的产量 | 第60页 |
| 4.5 小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61页 |
| 5.2 展望 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第68页 |
