| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 引言 | 第7-8页 |
| 1 文献综述 | 第8-18页 |
| 1.1 百合斑驳病毒（LMoV）研究进展 | 第8-11页 |
| 1.1.1 LMoV概述 | 第8页 |
| 1.1.2 LMoV的基因组学 | 第8页 |
| 1.1.3 LMoV侵染对百合的生理病理影响 | 第8-9页 |
| 1.1.4 LMoV的检测 | 第9-10页 |
| 1.1.5 LMoV的常规防治 | 第10-11页 |
| 1.2 RNAi技术 | 第11-13页 |
| 1.2.1 RNAi的发现 | 第11页 |
| 1.2.2 RNAi的作用机制 | 第11-13页 |
| 1.3 RNA沉默防治植物病毒的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.3.1 植物抗病毒基因工程的发展 | 第13-15页 |
| 1.3.2 病毒对植物RNA沉默的抑制 | 第15页 |
| 1.4 原核表达dsRNA进行植物抗病毒的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.5 本研究的目的、意义和内容 | 第17-18页 |
| 2 ihpRNA干扰载体的构建 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 感病百合叶片总RNA的提取 | 第18-19页 |
| 2.2.2 LMoV CI基因的获得 | 第19-20页 |
| 2.2.3 重组质粒pMD~(TM)18-CI的获得 | 第20-21页 |
| 2.2.4 CI_(517)、CI_(295)、CP_(400)正反片段的获得 | 第21-22页 |
| 2.2.5 OZ-LIC法构建ihpRNA干扰载体 | 第22-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-26页 |
| 2.3.1 重组质粒pMD~(TM)18-CI的获得 | 第24-25页 |
| 2.3.2 CI_(517)、CI_(295)、CP_(400)正反片段的获得 | 第25-26页 |
| 2.3.3 ihpRNA干扰载体的获得 | 第26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 2.5 小结 | 第27-28页 |
| 3 瞬时表达检测ihpRNA干扰载体的抗性 | 第28-33页 |
| 3.1 实验材料和试剂 | 第28页 |
| 3.2 实验方法 | 第28-30页 |
| 3.2.1 农杆菌工程菌的获得 | 第28-29页 |
| 3.2.2 农杆菌渗入法介导的瞬时表达 | 第29页 |
| 3.2.3 瞬时干扰作用的抗性检测 | 第29-30页 |
| 3.3 结果与分析 | 第30-32页 |
| 3.3.1 农杆菌工程菌的获得 | 第30-31页 |
| 3.3.2 瞬时干扰作用的抗性效果 | 第31-32页 |
| 3.4 讨论 | 第32页 |
| 3.5 小结 | 第32-33页 |
| 4 原核表达LMoV编码基因同源dsRNA的研究 | 第33-41页 |
| 4.1 实验材料和试剂 | 第33页 |
| 4.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 4.2.1 LMoV-dsRNA表达载体的构建 | 第33-34页 |
| 4.2.2 LMoV-dsRNA原核表达工程菌的构建 | 第34-35页 |
| 4.2.3 LMoV-dsRNA的诱导表达 | 第35页 |
| 4.2.4 LMoV-dsRNA的鉴定 | 第35-36页 |
| 4.2.5 LMoV-dsRNA的诱导条件优化 | 第36页 |
| 4.3 结果与分析 | 第36-40页 |
| 4.3.1 LMoV-dsRNA表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 4.3.2 LMoV-dsRNA原核表达工程菌的构建 | 第37-38页 |
| 4.3.3 LMoV-dsRNA的诱导表达 | 第38页 |
| 4.3.4 LMoV-dsRNA的诱导条件优化 | 第38-40页 |
| 4.4 讨论 | 第40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 5 LMoV-dsRNA的抗病性鉴定 | 第41-51页 |
| 5.1 实验材料和试剂 | 第41页 |
| 5.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 5.2.1 高压破碎法制备dsRNA粗制品 | 第41页 |
| 5.2.2 异丙醇沉淀法提取dsRNA | 第41页 |
| 5.2.3 dsRNA粗制品的稳定性检测 | 第41-42页 |
| 5.2.4 dsRNA的抗病分析 | 第42-44页 |
| 5.3 结果与分析 | 第44-49页 |
| 5.3.1 LMoV-dsRNA的稳定性检测结果 | 第44-45页 |
| 5.3.2 百合的发病情况 | 第45-46页 |
| 5.3.3 RT-PCR检测 | 第46-48页 |
| 5.3.4 实时定量分析 | 第48-49页 |
| 5.4 讨论 | 第49-50页 |
| 5.5 小结 | 第50-51页 |
| 6 结论与展望 | 第51-52页 |
| 6.1 结论 | 第51页 |
| 6.2 有待进一步开展的工作 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录A 常用培养基、缓冲液及抗生素配方 | 第57-60页 |
| 附录B 实验所用仪器 | 第60-61页 |
| 附录C 实验所用质粒图谱及基因序列 | 第61-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-67页 |
