优良玉米自交系抗虫转基因研究及可育转基因植株的获得和检测
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7页 |
| 前言 | 第8-37页 |
| 1． 抗虫基因及其应用 | 第9-23页 |
| 1．1 微生物来源的抗虫基因 | 第9-11页 |
| 1．1．1 B．t．毒蛋白基因 | 第9-10页 |
| 1．1．2 异戊稀基转移酶基因 | 第10-11页 |
| 1．1．3 胆固醇氧化酶杀虫基因 | 第11页 |
| 1．1．4 营养杀虫蛋白基因 | 第11页 |
| 1．2 植物来源的抗虫基因 | 第11-16页 |
| 1．2．1 植物蛋白酶抑制剂基因 | 第11-15页 |
| 1．2．2 淀粉酶抑制剂基因 | 第15页 |
| 1．2．3 植物外源凝集素基因 | 第15-16页 |
| 1．3 动物来源的抗虫基因 | 第16-17页 |
| 1．4 抗虫植物基因工程面临的问题及解决策略 | 第17-23页 |
| 1．4．1 昆虫对转基因植株产生抗性 | 第17-18页 |
| 1．4．2 外源基因在转基因植株中表达量低 | 第18-21页 |
| 1．4．3 缺乏抗虫效果好的抗虫基因 | 第21-22页 |
| 1．4．4 转基因植株中的外源基因失活 | 第22-23页 |
| 1．4．5 转基因植物的安全性问题 | 第23页 |
| 2． 玉米转基因研究进展 | 第23-36页 |
| 2．1 受体系统 | 第24-26页 |
| 2．2 基因导入方法 | 第26-31页 |
| 2．2．1 农杆菌介导的遗传转化 | 第26-28页 |
| 2．2．2 基因枪法 | 第28-30页 |
| 2．2．3 电击法 | 第30页 |
| 2．2．4 PEG法 | 第30页 |
| 2．2．5 其它转化 | 第30-31页 |
| 2．3 报告基因和选择抗性基因 | 第31-32页 |
| 2．4 外源基因的表达调控 | 第32-34页 |
| 2．5 玉米转基因研究的应用 | 第34-36页 |
| 3． 论文开题设想 | 第36-37页 |
| 材料与仪器 | 第37-41页 |
| 1． 材料和质粒 | 第37-38页 |
| 2． 重要仪器设备 | 第38页 |
| 3． 重要生化试剂 | 第38页 |
| 4． 培养基配制 | 第38-39页 |
| 5． PCR引物 | 第39-41页 |
| 实验方法 | 第41-51页 |
| 1． 表达载体构建 | 第41页 |
| 2． 基因枪转化法玉米 | 第41-43页 |
| 2．1 转化受体的准备 | 第41页 |
| 2．2 金粉的制备 | 第41页 |
| 2．3 微弹DNA的制备 | 第41页 |
| 2．4 基因枪的准备 | 第41-42页 |
| 2．5 基因枪的轰击 | 第42页 |
| 2．6 过渡培养 | 第42页 |
| 2．7 抗性愈伤组织的筛选 | 第42-43页 |
| 2．8 抗性植株的再生和移栽 | 第43页 |
| 3． 分子检测 | 第43-46页 |
| 3．1 植物DNA的提取 | 第43页 |
| 3．2 重要溶液配制 | 第43-44页 |
| 3．3 转基因玉米的PCR鉴定 | 第44页 |
| 3．4 转基因玉米的PCR-Southern鉴定 | 第44页 |
| 3．5 转基因玉米的Southern鉴定 | 第44-46页 |
| 4． 转化SCK玉米叶片胰蛋白酶抑制剂活性测定 | 第46-47页 |
| 5． ELISA法检测Bt毒蛋白含量 | 第47-49页 |
| 6． 抗虫检测 | 第49-51页 |
| 结果与讨论 | 第51-70页 |
| 1． 植物表达载体 | 第51-52页 |
| 2． 玉米基因枪转化系统的建立 | 第52-59页 |
| 2．1 胚性愈伤组织的诱导 | 第52-53页 |
| 2．1．1 基因型对胚性愈伤组织诱导的影响 | 第52-53页 |
| 2．1．2 胚龄对胚性愈伤组织诱导的影响 | 第53页 |
| 2．1．3 培养基成分对胚性组织诱导的影响 | 第53页 |
| 2．2 胚性愈伤组织的继代繁殖 | 第53-54页 |
| 2．3 筛选试剂敏感性实验和抗性愈伤的获得 | 第54-56页 |
| 2．4 抗性愈伤组织的再生和分化 | 第56-58页 |
| 2．5 转基因植株的定植 | 第58-59页 |
| 3． 转基因植株的获得和鉴定 | 第59-70页 |
| 3．1 转基因植株的获得 | 第59页 |
| 3．2 转基因植株的分子检测 | 第59-60页 |
| 3．2．1 PCR检测 | 第59页 |
| 3．2．2 PCR-Southern检测 | 第59-60页 |
| 3．2．3 Southern blot检测 | 第60页 |
| 3．3 B．t毒蛋白含量ELISA检测结果 | 第60-62页 |
| 3．4 胰蛋白酶抑制剂活性检测结果 | 第62-64页 |
| 3．5 抗虫测试 | 第64-70页 |
| 结论 | 第70-71页 |
| 主要参考文献 | 第71-77页 |
| 图版及说明 | 第77-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
