| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-33页 |
| 1.1 EGF的发现和命名 | 第11页 |
| 1.2 EGF的来源与释放的调节 | 第11-12页 |
| 1.2.1 EGF的来源和分布 | 第11-12页 |
| 1.2.2 EGF的合成与释放的调节 | 第12页 |
| 1.3 EGF的结构与功能关系 | 第12-19页 |
| 1.3.1 EGF的结构 | 第12-15页 |
| 1.3.2 hEGF的结构与功能关系 | 第15页 |
| 1.3.3 EGF受体 | 第15-18页 |
| 1.3.3.1 EGFR及其基因结构 | 第15-17页 |
| 1.3.3.2 EGFR代谢 | 第17-18页 |
| 1.3.4 EGF和受体作用机制 | 第18-19页 |
| 1.4 EGF家族 | 第19-21页 |
| 1.4.1 EGF家族的成员 | 第19-20页 |
| 1.4.2 EGF家族的结构特征 | 第20-21页 |
| 1.5 EGF的生物学效应及应用 | 第21-25页 |
| 1.5.1 EGF的生物学效应 | 第21-25页 |
| 1.5.2 EGF的应用 | 第25页 |
| 1.5.2.1 基础研究方面 | 第25页 |
| 1.5.2.2 临床医学领域 | 第25页 |
| 1.5.2.3 畜牧业上 | 第25页 |
| 1.6 重组EGF的表达分泌系统 | 第25-29页 |
| 1.6.1 大肠杆菌 | 第26-27页 |
| 1.6.2 枯草杆菌 | 第27页 |
| 1.6.3 短芽孢杆菌 | 第27页 |
| 1.6.4 酵母菌(酿酒酵母及巴斯德毕赤氏酵母菌) | 第27-28页 |
| 1.6.5 哺乳动物细胞 | 第28页 |
| 1.6.6 高等植物 | 第28-29页 |
| 1.6.7 蓝藻 | 第29页 |
| 1.7 EGF的分离和纯化 | 第29-30页 |
| 1.7.1 mEGF | 第29页 |
| 1.7.2 hEGF | 第29-30页 |
| 1.7.3 其它来源的EGF | 第30页 |
| 1.8 EGF的生物活性检测 | 第30-31页 |
| 1.8.1 体内生物活性检测 | 第30页 |
| 1.8.2 体外生物活性检测 | 第30-31页 |
| 1.8.3 放射分析法 | 第31页 |
| 1.8.3.1 放射免疫分析 | 第31页 |
| 1.8.3.2 放射受体分析 | 第31页 |
| 1.8.3.3 酶免疫分析 | 第31页 |
| 1.8.3.4 酶联免疫吸附分析 | 第31页 |
| 1.8.3.5 反相HPLC | 第31页 |
| 1.8.3.6 免疫荧光技术 | 第31页 |
| 1.9 EGF制药的现状和展望 | 第31-33页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第33-45页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第33-35页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第33-34页 |
| 2.1.3 主要生化试剂 | 第34-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-45页 |
| 2.2.1 EGF基因的克隆 | 第35-36页 |
| 2.2.1.1 引物的设计与合成 | 第35页 |
| 2.2.1.2 RNA提取及逆转录反应 | 第35-36页 |
| 2.2.1.3 PCR(聚合酶链式反应)扩增 | 第36页 |
| 2.2.2 EGF基因序列的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.3 EGF基因的原核表达 | 第37-45页 |
| 2.2.3.1 融合表达载体构建 | 第37-38页 |
| 2.2.3.2 转化与重组质粒的筛选 | 第38页 |
| 2.2.3.3 蛋白诱导表达 | 第38-39页 |
| 2.2.3.4 重组hEGF融合蛋白的分离纯化 | 第39-41页 |
| 2.2.3.5 重组hEGF的活性检测 | 第41页 |
| 2.2.3.6 重组hEGF的western检测 | 第41-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-59页 |
| 3.1 EGF基因的PCR扩增结果 | 第45页 |
| 3.2 测序结果及分析 | 第45页 |
| 3.2.1 EGF(引物EGF-P1,EGF-P2)测序结果 | 第45页 |
| 3.2.2 EGF(引物EGF-P1,EGF-P2)测序结果分析 | 第45页 |
| 3.3 融合表达载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.4 重组质粒序列的测定及分析 | 第46-49页 |
| 3.4.1 重组质粒pGEX-4t-1 (+)- hEGF测序结果 | 第47页 |
| 3.4.1.1 测序引物为Pgex 5’引物,测序结果 | 第47页 |
| 3.4.1.2 重组质粒pGEX-4t-1 (+)- hEGF测序结果分析 | 第47页 |
| 3.4.2 重组质粒pGEX-6p-1 (+)-hEGF测序结果 | 第47-49页 |
| 3.4.2.1 测序引物为Pgex 5’引物,测序结果 | 第47页 |
| 3.4.2.2 重组质粒pGEX-6p-1 (+)- hEGF测序结果分析 | 第47-49页 |
| 3.5 重组蛋白的诱导表达 | 第49-51页 |
| 3.6 重组HEGF融合蛋白的分离纯化 | 第51-53页 |
| 3.6.1 酶溶法确定重组hEGF融合蛋白的存在方式 | 第51页 |
| 3.6.2 重组hEGF融合蛋白的收集 | 第51页 |
| 3.6.3 重组hEGF融合蛋白的复性和纯化 | 第51-53页 |
| 3.7 重组HEGF的活性检测结果 | 第53-54页 |
| 3.8 重组HEGF的WESTERN 检测结果 | 第54页 |
| 3.9 讨论与结论 | 第54-59页 |
| 3.9.1 讨 论 | 第54-57页 |
| 3.9.1.1 目的蛋白的表达 | 第55页 |
| 3.9.1.2 目的蛋白的分离纯化和活性测定 | 第55-57页 |
| 3.9.2 结 论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67-70页 |
