| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 缩略词表（Abbreviation） | 第7-10页 |
| 文献综述 | 第10-17页 |
| 1 牛性成熟的研究进展 | 第10-15页 |
| 2 牛性成熟相关基因在遗传育种中的应用 | 第15页 |
| 3 目前研究存在的问题 | 第15-16页 |
| 4 研究前景与展望 | 第16-17页 |
| 1 引言 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-26页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第18-19页 |
| 2.1.4 菌株及载体 | 第19页 |
| 2.2 牛血液DNA的提取及检测 | 第19页 |
| 2.2.1 牛血液基因组DNA的提取（试剂盒法） | 第19页 |
| 2.2.2 DNA浓度和纯度的检测 | 第19页 |
| 2.3 引物设计和PCR扩增及检测 | 第19-21页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第19-20页 |
| 2.3.2 最佳PCR扩增体系（25μL体系） | 第20页 |
| 2.3.3 琼脂糖凝胶电泳 | 第20-21页 |
| 2.4 PCR产物测序 | 第21页 |
| 2.5 牛GPR54基因 5’端调控区的克隆 | 第21-22页 |
| 2.5.1 PCR产物的快速纯化（试剂盒法） | 第21页 |
| 2.5.2 双酶切反应 | 第21页 |
| 2.5.3 双酶切产物的纯化 | 第21页 |
| 2.5.4 双酶切产物与载体连接 | 第21-22页 |
| 2.5.5 转化 | 第22页 |
| 2.5.6 质粒DNA的小量提取----试剂盒法 | 第22页 |
| 2.5.7 重组质粒的鉴定 | 第22页 |
| 2.6 报告基因 | 第22-24页 |
| 2.6.1 293T细胞培养及传代 | 第22-23页 |
| 2.6.2 细胞铺板及细胞转染 | 第23页 |
| 2.6.3 细胞转染效率检测 | 第23-24页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR验证 | 第24页 |
| 2.7.1 牛血液白细胞DNA提取（试剂盒法） | 第24页 |
| 2.7.2 引物设计和荧光定量PCR | 第24页 |
| 2.8 数据分析 | 第24-26页 |
| 2.8.1 软件工具 | 第24页 |
| 2.8.2 基因频率 | 第24-25页 |
| 2.8.3 分析方法 | 第25-26页 |
| 3 结果与分析 | 第26-32页 |
| 3.1 DNA提取效果 | 第26页 |
| 3.2 牛GPR54基因启动子区目的片段序列的特性 | 第26-27页 |
| 3.2.1 目的片段的PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| 3.3 牛GPR54基因 5’调控区的SNPs | 第27-28页 |
| 3.3.1 目的片段序列的特性 | 第27-28页 |
| 3.4 C-816T和T-754C在牛群中的分布 | 第28-29页 |
| 3.5 不同基因型启动子的双报告基因表达结果 | 第29-30页 |
| 3.5.1 构建双荧光素酶报告基因重组质粒 | 第29-30页 |
| 3.5.2 -816CT-754 和-816TC-754 的启动子效率比较 | 第30页 |
| 3.6 不同品种牛GPR54基因实时荧光定量表达效果检测 | 第30-31页 |
| 3.7 C-816T和T-754C变异与牛初情期的关联性 | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-36页 |
| 4.1 GPR54基因多态性 | 第32-33页 |
| 4.2 GPR54基因启动子多态性对转录效率的影响 | 第33页 |
| 4.3 转录因子与基因调控之间的关系 | 第33-36页 |
| 5 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 作者简介 | 第45页 |
