| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 缩略语表（ABBREVIATION） | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-17页 |
| 引言 | 第17-18页 |
| 1 材料和方法 | 第18-25页 |
| 1.1 材料 | 第18-20页 |
| 1.1.1 病料处理 | 第18页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第18-19页 |
| 1.1.3 主要仪器设备 | 第19页 |
| 1.1.4 所用溶液、试剂的配制 | 第19-20页 |
| 1.2 方法 | 第20-25页 |
| 1.2.1 PCR反应的引物、反应体系和反应条件 | 第20-21页 |
| 1.2.2 总RNA的提取和反转录 | 第21页 |
| 1.2.3 PEDV毒株的分离和培养 | 第21-22页 |
| 1.2.4 PCR产物回收、纯化、PMD18-T载体连接 | 第22-24页 |
| 1.2.5 SYBR GREEN I实时荧光定量PCR的建立和应用 | 第24-25页 |
| 阳性标准品的制备 | 第24页 |
| 荧光定量PCR反应条件的优化 | 第24页 |
| 荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线的建立 | 第24页 |
| 特异性检验 | 第24页 |
| 灵敏性测定 | 第24页 |
| 重复性检验 | 第24-25页 |
| 2 结果及分析 | 第25-43页 |
| 2.1 PEDV感染样品的鉴定 | 第25页 |
| 2.2 病毒的培养 | 第25-27页 |
| 2.3 分离毒株的鉴定 | 第27-31页 |
| 2.3.1 分离毒株的PCR鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.2 荧光定量RT-PCR反应条件的优化 | 第28页 |
| 2.3.3 荧光定量RT-PCR标准曲线的建立 | 第28-29页 |
| 2.3.4 特异性检测 | 第29页 |
| 2.3.5 灵敏性测定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 重复性试验 | 第30-31页 |
| 2.4 ORF3基因、M基因、N基因的扩增 | 第31页 |
| 2.5 质粒的鉴定、测序及序列拼接 | 第31-32页 |
| 2.6 ORF3基因、M基因和N基因的分析 | 第32-43页 |
| 2.6.1 ORF3基因的同源性分析和变化分析 | 第32-34页 |
| 2.6.2 ORF3基因的遗传进化树分析 | 第34-35页 |
| 2.6.3 M基因的同源性分析和变化分析 | 第35-37页 |
| 2.6.4 M基因的遗传进化树分析 | 第37-38页 |
| 2.6.5 N基因的同源性分析 | 第38-41页 |
| 2.6.6 N基因的遗传进化树分析 | 第41-43页 |
| 3 讨论 | 第43-49页 |
| 3.1 PEDV在细胞上的培养 | 第43页 |
| 3.2 SYBR GREEN I实时荧光定量PCR实验 | 第43-44页 |
| 3.3 ORF3基因的序列分析及遗传进化树分析 | 第44-46页 |
| 3.3.1 ORF3基因的同源性分析 | 第44-45页 |
| 3.3.2 ORF3核苷酸和氨基酸的序列分析 | 第45页 |
| 3.3.3 ORF3基因序列遗传进化树分析 | 第45-46页 |
| 3.4 M基因的序列分析及遗传进化树分析 | 第46-47页 |
| 3.4.1 M基因的同源性分析 | 第46页 |
| 3.4.2 M核苷酸和氨基酸的序列分析 | 第46-47页 |
| 3.4.3 M基因序列遗传进化树分析 | 第47页 |
| 3.5 N基因的序列分析及遗传进化树分析 | 第47-49页 |
| 3.5.1 N基因的同源性分析 | 第47页 |
| 3.5.2 N核苷酸和氨基酸的序列分析 | 第47-48页 |
| 3.5.3 N基因序列遗传进化树分析 | 第48-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 附录A 6 株毒株的同源性分析 | 第57-63页 |
| 附录B 6 株毒株ORF3、M、N基因的核苷酸序列 | 第63-67页 |
| 附录C 6 株毒株M基因的氨基酸序列 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |
| 硕士期间发表文章 | 第70页 |
