| 中文摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 中英文缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-24页 |
| 1.1 大豆异黄酮的研究 | 第15-19页 |
| 1.1.1 异黄酮的生物功能 | 第15-16页 |
| 1.1.2 大豆异黄酮的种类及分布 | 第16-17页 |
| 1.1.3 异黄酮生物合成相关酶基因 | 第17-18页 |
| 1.1.4 影响异黄酮合成的环境因素 | 第18页 |
| 1.1.5 大豆异黄酮积累 QTL 位点相关研究进展 | 第18-19页 |
| 1.2 bHLH 转录因子的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.2.1 bHLH 转录因子的结构与分类 | 第19-20页 |
| 1.2.2 bHLH 的生物学功能 | 第20-21页 |
| 1.3 分子生物学研究方法 | 第21-22页 |
| 1.3.1 基因表达谱 | 第21页 |
| 1.3.2 酵母双杂文库 | 第21-22页 |
| 1.3.3 豆科模式转化系统 | 第22页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 大豆籽粒不同发育时期基因数字表达谱的生物信息学分析 | 第24-30页 |
| 2.1 材料 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-25页 |
| 2.2.1 基因表达谱测序 | 第24页 |
| 2.2.2 数字表达谱生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 reads 各个位置核苷酸的检测质量 | 第25-26页 |
| 2.3.2 测序饱和度的分析 | 第26-27页 |
| 2.3.3 序列拷贝数的分析 | 第27-28页 |
| 2.3.4 差异基因表达量的统计 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 大豆籽粒不同发育时期异黄酮合成相关基因的表达分析 | 第30-51页 |
| 3.1 材料 | 第30-33页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第30页 |
| 3.1.4 试剂配制 | 第30页 |
| 3.1.5 qRT- PCR 引物 | 第30-33页 |
| 3.2 方法 | 第33-36页 |
| 3.2.2 大豆籽粒不同发育时期异黄酮含量测定 | 第33-34页 |
| 3.2.3 异黄酮相关基因表达模式聚类分析 | 第34页 |
| 3.2.4 bHLH 转录因子家族进化分析及表达模式聚类分析 | 第34页 |
| 3.2.5 异黄酮相关基因 qRT-PCR 表达模式分析 | 第34-36页 |
| 3.2.6 大豆异黄酮合成相关基因的遗传图谱绘制 | 第36页 |
| 3.3 结果与分析 | 第36-49页 |
| 3.3.1 大豆籽粒不同发育时期异黄酮含量的测定 | 第36-38页 |
| 3.3.2 异黄酮相关基因表达模式聚类分析结果 | 第38-41页 |
| 3.3.3 bHLH 转录因子家族进化分析及表达模式聚类分析结果 | 第41-42页 |
| 3.3.4 异黄酮相关基因 qRT-PCR 表达模式分析结果 | 第42-45页 |
| 3.3.5 大豆异黄酮合成相关基因的遗传图谱 | 第45-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 大豆 GmbHLH3a 和 GmMYC2a 基因的克隆及序列分析 | 第51-64页 |
| 4.1 材料 | 第51-53页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 4.1.2 载体和菌株 | 第51页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第51页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第51-52页 |
| 4.1.5 试剂配制 | 第52页 |
| 4.1.6 PCR 引物 | 第52-53页 |
| 4.2 方法 | 第53-58页 |
| 4.2.1 大豆总 RNA 的提取 | 第53页 |
| 4.2.2 第一链 cDNA 的合成 | 第53-54页 |
| 4.2.3 大豆 GmbHLH3a 和 GmMYC2a 基因 cDNA 全长 PCR 扩增 | 第54-55页 |
| 4.2.4 PCR 产物回收 | 第55页 |
| 4.2.5 PCR 产物的克隆 | 第55-56页 |
| 4.2.6 大肠杆菌感受态 DH5α细胞的制备和转化 | 第56-57页 |
| 4.2.7 转化子的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.2.8 生物信息学分析 | 第58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-62页 |
| 4.3.1 大豆 GmbHLH3a 和 GmMYC2a 基因 cDNA 的全序列的获得 | 第58-59页 |
| 4.3.2 核苷酸序列特征分析及蛋白质的结构和功能预测 | 第59-61页 |
| 4.3.3 GmbHLH3a 和 GmMYC2a 相互作用蛋白质预测 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-63页 |
| 4.5 小结 | 第63-64页 |
| 第五章 GmbHLH3a 基因功能的初步分析 | 第64-78页 |
| 5.1 材料 | 第64-66页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第64页 |
| 5.1.2 质粒及菌株 | 第64页 |
| 5.1.3 工具酶及生化试剂 | 第64页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第64页 |
| 5.1.5 试剂配制 | 第64-66页 |
| 5.2 方法 | 第66-73页 |
| 5.2.1 引物设计 | 第66-67页 |
| 5.2.2 原核表达 | 第67-69页 |
| 5.2.3 亚细胞定位 | 第69-72页 |
| 5.2.4 GmbHLH3a 和 GmMYC2a 基因激活结构域的真核检测 | 第72-73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-76页 |
| 5.3.1 原核表达 | 第73-74页 |
| 5.3.2 GmbHLH3a 和 GmMYC2a 融合蛋白的亚细胞定位 | 第74-75页 |
| 5.3.3 GmbHLH3a 和 GmMYC2a 蛋白转录激活活性鉴定 | 第75-76页 |
| 5.4 讨论 | 第76-77页 |
| 5.5 小结 | 第77-78页 |
| 第六章 大豆胚发育期酵母双杂文库的构建及与大豆 GmbHLH3a 互作蛋白的筛选 | 第78-85页 |
| 6.1 材料 | 第78页 |
| 6.1.1 植物材料 | 第78页 |
| 6.1.2 质粒及菌株 | 第78页 |
| 6.1.3 工具酶及生化试剂 | 第78页 |
| 6.1.4 主要仪器设备 | 第78页 |
| 6.1.5 试剂配制 | 第78页 |
| 6.2 方法 | 第78-81页 |
| 6.2.1 引物设计 | 第78-79页 |
| 6.2.2 大豆籽粒生长期均一化酵母双杂交 cDNA 文库构建 | 第79-80页 |
| 6.2.3 酵母双杂交体系筛选与 GmbHLH3a 互作蛋白 | 第80-81页 |
| 6.2.4 筛选到的互作蛋白的生物信息学分析 | 第81页 |
| 6.3 结果与分析 | 第81-83页 |
| 6.3.1 酵母文库重组率和插入片段长度鉴定 | 第81页 |
| 6.3.2 与 GmbHLH3a 互作蛋白的筛选 | 第81-83页 |
| 6.3.3 筛选到的互做蛋白生物信息学分析 | 第83页 |
| 6.4 讨论 | 第83-85页 |
| 第七章 GmbHLH3a 基因在大豆发根中的表达及调控异黄酮合成的功能分析 | 第85-91页 |
| 7.1 材料 | 第85-86页 |
| 7.2 方法 | 第86-87页 |
| 7.2.1 GmbHLH3a 基因的发根农杆菌的遗传转化 | 第86-87页 |
| 7.2.2 阳性发根的筛选及鉴定 | 第87页 |
| 7.2.3 HPLC 测定转基因发根异黄酮含量 | 第87页 |
| 7.3 结果与分析 | 第87-90页 |
| 7.3.1 侵染大豆发状根及诱导发根的筛选及鉴定 | 第87-89页 |
| 7.3.2 HPLC 测定转基因发根异黄酮含量结果 | 第89-90页 |
| 7.4 讨论 | 第90-91页 |
| 讨论 | 第91-94页 |
| 参考文献 | 第94-105页 |
| 作者简介及科研成果 | 第105页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
