| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 1 文献综述 | 第13-24页 |
| 1.1 动物转基因技术研究进展 | 第13-18页 |
| 1.1.1 动物转基因技术概述 | 第13页 |
| 1.1.2 动物转基因技术的应用 | 第13-16页 |
| 1.1.3 转基因动物的制备方法 | 第16-18页 |
| 1.2 定点整合转基因动物研究进展 | 第18-20页 |
| 1.2.1 利用同源重组实现定点整合 | 第18-19页 |
| 1.2.2 位点特异性同源重组系统 | 第19-20页 |
| 1.3 肿瘤治疗抗体的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.3.1 肿瘤治疗抗体Avastin | 第20-21页 |
| 1.3.2 生物技术在肿瘤抗体制备中的应用 | 第21页 |
| 1.4 人乳铁蛋白的研究概况 | 第21-23页 |
| 1.4.1 乳铁蛋白的生物学功能 | 第21-23页 |
| 1.4.2 人乳铁蛋白的转基因研究现状 | 第23页 |
| 1.5 目的意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-40页 |
| 2.1 试验材料 | 第24-25页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 实验所需仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.3 药品及主要试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-39页 |
| 2.2.1 重组人溶菌酶山羊原代耳皮成纤维细胞的分离、培养和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.2 Avastin基因定点整合质粒pTM-Asn的构建 | 第26-29页 |
| 2.2.3 TAT-Cre酶的纯化以及活性鉴定 | 第29-31页 |
| 2.2.4 Cre酶导入实现定点整合 | 第31-33页 |
| 2.2.5 Avastin整合细胞克隆的挑选和鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.6 人乳铁蛋白定点整合质粒pTM-hLf的构建及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.7 pTM-hLf和pBS185共转染实现定点整合 | 第35页 |
| 2.2.8 hLf整合细胞克隆的挑选及鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.9 卵母细胞制备、受体羊的同步与细胞株的准备 | 第36-37页 |
| 2.2.10 重构卵的制备、激活、包埋、回收与发育胚胎的移植 | 第37-38页 |
| 2.2.11 山羊胎儿的整合检测 | 第38-39页 |
| 2.3 实验设计 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-54页 |
| 3.1 重组人溶菌酶山羊原代成体成纤维细胞系的建立 | 第40-41页 |
| 3.2 Avastin定位表达框架的构建 | 第41-44页 |
| 3.3 TAT-Cre酶的表达与纯化 | 第44-46页 |
| 3.4 Avastin整合细胞的获得 | 第46-47页 |
| 3.5 Avastin-hlz-C10体细胞克隆 | 第47-48页 |
| 3.6 人乳铁蛋白定位表达框架的构建 | 第48-50页 |
| 3.7 hLf整合细胞的获得 | 第50-52页 |
| 3.8 hLfhlz-6体细胞克隆 | 第52-53页 |
| 3.9 hLf产胎儿的整合检测 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 4.1 供体细胞的选择和处理 | 第54-55页 |
| 4.2 Cre重组酶介导的盒式交换应用 | 第55-56页 |
| 4.3 Cre酶的不同导入方式 | 第56-57页 |
| 4.4 乳腺生物反应器的基因构件 | 第57页 |
| 4.5 进一步工作重点 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 附录Ⅰ 溶液配方 | 第66-68页 |
| 附录Ⅱ 阳性克隆理论序列 | 第68-73页 |
| 附录Ⅲ 攻读学位期间发表的学术论文 | 第73页 |
