| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 英文缩略表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第1章 miR-199a对肝星状细胞增殖、迁移和活化的影响 | 第14-33页 |
| 1.1 实验材料和仪器 | 第14-15页 |
| 1.1.1 实验细胞系和质粒 | 第14页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第14-15页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第15页 |
| 1.2 实验方法 | 第15-23页 |
| 1.2.1 细胞的复苏、传代以及冻存 | 第15-16页 |
| 1.2.2 qRT-PCR检测miR-199a的mRNA表达水平 | 第16-18页 |
| 1.2.3 CCK-8 实验检测肝星状细胞的增殖能力 | 第18-19页 |
| 1.2.4 细胞集落形成实验检测肝星状细胞的细胞集落形成能力 | 第19页 |
| 1.2.5 Transwell实验检测肝星状细胞的迁移能力 | 第19-20页 |
| 1.2.6 qRT-PCR检 测miR-199a对LX-2 细胞中 α-SMA和Collagen ImRNA表达水平的影响 | 第20-22页 |
| 1.2.7 Western blot检测miR-199a对LX-2 细胞中α-SMA蛋白表达水平的影响 | 第22-23页 |
| 1.2.8 统计分析 | 第23页 |
| 1.3 结果 | 第23-28页 |
| 1.3.1 过表达或封闭内源性miR-199a后细胞中miR-199a的表达水平 | 第23-24页 |
| 1.3.2 miR-199a对肝星状细胞增殖能力的影响 | 第24-25页 |
| 1.3.3 miR-199a对肝星状细胞集落形成能力的影响 | 第25-26页 |
| 1.3.4 miR-199a对肝星状细胞迁移能力的影响 | 第26-27页 |
| 1.3.5 miR-199a对肝星状细胞中α-SMA和collagen I mRNA表达水平的影响 | 第27页 |
| 1.3.6 miR-199a对肝星状细胞中α-SMA蛋白表达水平的影响 | 第27-28页 |
| 1.4 讨论 | 第28-30页 |
| 1.5 小结 | 第30页 |
| 参考文献 | 第30-33页 |
| 第2章 确定miR-199a在肝星状细胞中的靶基因 | 第33-50页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第33-34页 |
| 2.1.1 实验细胞系和质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第33页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-42页 |
| 2.2.1 qRT-PCR检测细胞中miR-199a和SIRT1 mRNA的表达水平 | 第34-37页 |
| 2.2.2 miR-199a靶基因的筛选 | 第37页 |
| 2.2.3 荧光报告载体的构建 | 第37-40页 |
| 2.2.4 双荧光报告载体实验 | 第40-42页 |
| 2.2.5 qRT-PCR检测miR-199a对LX-2 细胞中SIRT1 mRNA表达水平的影响 | 第42页 |
| 2.2.6 Western blot检测miR-199a对LX-2 细胞中SIRT1蛋白表达水平的影响 | 第42页 |
| 2.2.7 统计分析 | 第42页 |
| 2.3 结果 | 第42-47页 |
| 2.3.1 TGF-β1 处理的LX-2 细胞和未处理的细胞中α-SMA和collagen ImRNA的表达水平 | 第42-43页 |
| 2.3.2 TGF-β1 处理的LX-2 细胞和未处理的细胞中miR-199a和SIRT1mRNA的表达水平 | 第43-44页 |
| 2.3.3 miR-199a靶基因的筛选 | 第44页 |
| 2.3.4 EGFP荧光报告载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.3.5 EGFP荧光报告载体实验验证SIRT1是miR-199a的直接靶基因 | 第45-46页 |
| 2.3.6 miR-199a对肝星状细胞中SIRT1 mRNA表达水平的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.7 miR-199a对肝星状细胞中SIRT1蛋白表达水平的影响 | 第47页 |
| 2.4 讨论 | 第47-49页 |
| 2.5 小结 | 第49页 |
| 参考文献 | 第49-50页 |
| 第3章 SIRT1在肝星状细胞中的作用 | 第50-55页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第50页 |
| 3.1.1 实验细胞系 | 第50页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第50页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第50页 |
| 3.2 实验方法 | 第50-51页 |
| 3.2.1 siRNA-SIRT1有效性的验证 | 第50-51页 |
| 3.2.2 CCK-8 检测SIRT1对细胞增殖的影响 | 第51页 |
| 3.2.3 细胞集落形成实验检测SIRT1对细胞集落形成的影响 | 第51页 |
| 3.2.4 统计分析 | 第51页 |
| 3.3 结果 | 第51-53页 |
| 3.3.1 si-SIRT1有效性的验证 | 第51-52页 |
| 3.3.2 CCK-8 实验检测SIRT1对细胞增殖的影响 | 第52页 |
| 3.3.3 细胞集落形成实验检测SIRT1对细胞集落形成的影响 | 第52-53页 |
| 3.4 讨论 | 第53-54页 |
| 3.5 小结 | 第54页 |
| 参考文献 | 第54-55页 |
| 第4章 综述 | 第55-66页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 导师简介 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
| 学位论文数据集 | 第70页 |
