| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-28页 |
| 1.1 海洋放线菌及其天然活性物质 | 第13-15页 |
| 1.1.1 海洋放线菌 | 第13页 |
| 1.1.2 海洋链霉菌活性物质 | 第13页 |
| 1.1.3 致病真菌及抗真菌活性物质研究 | 第13-15页 |
| 1.2 卤化酶 | 第15-22页 |
| 1.2.1 卤化酶的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 黄素依赖型卤化酶及其研究进展 | 第16-22页 |
| 1.3 微生物活性物质研究的新技术 | 第22-27页 |
| 1.3.1 基因筛选 | 第22-23页 |
| 1.3.2 基于卤化酶的基因筛选 | 第23-25页 |
| 1.3.3 基因组挖掘 | 第25-26页 |
| 1.3.4 影像质谱 | 第26-27页 |
| 1.4 本课题研究内容和意义 | 第27-28页 |
| 2 海洋放线菌卤化酶的基因筛选 | 第28-40页 |
| 2.1 引言 | 第28页 |
| 2.2 实验材料 | 第28-30页 |
| 2.2.1 供试菌株 | 第28页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第29页 |
| 2.2.4 培养基的配置 | 第29-30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-33页 |
| 2.3.1 海洋放线菌的活化及基因组DNA提取 | 第30页 |
| 2.3.2 卤化酶基因筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.3 卤化酶基因的克隆、测序及分析 | 第31-32页 |
| 2.3.4 阳性菌株抗菌谱的测定 | 第32页 |
| 2.3.5 阳性菌株的菌种鉴定 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第33-39页 |
| 2.4.1 卤化酶基因筛选结果 | 第33页 |
| 2.4.2 卤化酶氨基酸序列的同源性分析 | 第33-35页 |
| 2.4.3 卤化酶基因筛选阳性菌株抗菌谱 | 第35-36页 |
| 2.4.4 卤化酶基因筛选阳性菌株的菌种鉴定 | 第36-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 3 海洋链霉菌L131抗真菌活性物质研究 | 第40-51页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 供试菌株 | 第40页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第41页 |
| 3.2.4 培养基的配置 | 第41-42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-43页 |
| 3.3.1 培养基和碳源优化 | 第42页 |
| 3.3.2 抑菌活性物质性质研究 | 第42页 |
| 3.3.3 活性物质分离纯化 | 第42-43页 |
| 3.3.4 活性物质抑制番茄叶霉菌的机理研究 | 第43页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第43-50页 |
| 3.4.1 培养基及碳源对发酵液抑菌活性的影响 | 第43-45页 |
| 3.4.2 抑菌活性物质的稳定性和极性 | 第45-46页 |
| 3.4.3 大孔吸附树脂分离L131抑菌活性物质 | 第46-47页 |
| 3.4.4 活性物质对番茄叶霉菌细胞膜、孢子及ROS的影响 | 第47-50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 4 星海链霉菌卤化酶的酶功能分析 | 第51-66页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 供试菌株及质粒 | 第51页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第51-52页 |
| 4.2.3 主要实验试剂 | 第52页 |
| 4.2.4 培养基的配置 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-56页 |
| 4.3.1 pET28a-sinH重组蛋白表达 | 第52-54页 |
| 4.3.2 pHUIE-sinH重组蛋白表达及纯化 | 第54页 |
| 4.3.3 共表达系统构建,诱导表达及蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 4.3.4 黄素还原酶Fre表达及分离纯化 | 第55页 |
| 4.3.5 卤化酶活性检测 | 第55-56页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第56-65页 |
| 4.4.1 pET28a-sinH重组蛋白不可溶表达 | 第56-57页 |
| 4.4.2 pHUIE-sinH重组蛋白可溶表达及纯化 | 第57-60页 |
| 4.4.3 共表达系统构建,可溶表达及蛋白纯化 | 第60-62页 |
| 4.4.4 黄素还原酶Fre可溶性表达及分离纯化 | 第62-64页 |
| 4.4.5 卤化酶活性检测HPLC图 | 第64-65页 |
| 4.5 小结 | 第65-66页 |
| 5 星海链霉菌卤化酶的基因破坏研究 | 第66-84页 |
| 5.1 引言 | 第66页 |
| 5.2 实验材料 | 第66-67页 |
| 5.2.1 供试菌株 | 第66页 |
| 5.2.2 主要实验仪器 | 第66-67页 |
| 5.2.3 主要实验试剂 | 第67页 |
| 5.2.4 培养基的配置 | 第67页 |
| 5.3 实验方法 | 第67-74页 |
| 5.3.1 破坏子的构建和验证 | 第67-71页 |
| 5.3.2 破坏子的抗补体活性检测 | 第71-73页 |
| 5.3.3 破坏子的抗菌活性检测 | 第73页 |
| 5.3.4 破坏子活性物质分离纯化 | 第73-74页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第74-83页 |
| 5.4.1 破坏子的获得及验证 | 第74-78页 |
| 5.4.2 破坏子抗补体活性 | 第78页 |
| 5.4.3 破坏子对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌抑制作用 | 第78-80页 |
| 5.4.4 破坏子活性物质的初步分离纯化 | 第80-83页 |
| 5.5 小结 | 第83-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 创新点 | 第85页 |
| 展望 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 附录A 卤化酶氨基酸序列及菌株L131的16S rRNA序列 | 第94-96页 |
| 附录B 黄素还原酶核酸序列及氨基酸序列 | 第96-97页 |
| 附录C 质粒片段序列 | 第97-100页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第100-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
