摘要 | 第3-5页 |
ABSTRACT | 第5-7页 |
缩写词及中英文对照 | 第8-14页 |
1 前言 | 第14-30页 |
1.1 辣椒病毒病的危害 | 第14-15页 |
1.2 为害辣椒的病毒种类 | 第15-16页 |
1.3 为害中国辣椒的病毒种类及其发生特点 | 第16-17页 |
1.3.1 为害中国辣椒的病毒种类 | 第16-17页 |
1.3.2 我国辣椒病毒病发生特点 | 第17页 |
1.4 侵染辣椒的几种重要病毒 | 第17-22页 |
1.4.1 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV) | 第17-18页 |
1.4.2 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV) | 第18页 |
1.4.3 辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV) | 第18-19页 |
1.4.4 马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY) | 第19页 |
1.4.5 甜椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV) | 第19页 |
1.4.6 蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus 2,BBWV-2) | 第19-20页 |
1.4.7 辣椒叶脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV) | 第20-22页 |
1.5 广东省辣椒病毒病研究进展 | 第22-23页 |
1.6 辣椒病毒病检测及鉴定技术 | 第23-26页 |
1.6.1 生物学检测法 | 第23页 |
1.6.2 电镜检测技术 | 第23-24页 |
1.6.3 血清学方法 | 第24页 |
1.6.4 分子生物学检测技术 | 第24-26页 |
1.6.4.1 核酸杂交技术 | 第24-25页 |
1.6.4.2 多聚酶链式反应(RT-PCR) | 第25页 |
1.6.4.3 实时荧光定量RT-PCR | 第25-26页 |
1.6.4.4 DNA微列阵技术 | 第26页 |
1.7 小RNA深度测序技术 | 第26-27页 |
1.8 辣椒病毒病的防治 | 第27-29页 |
1.8.1 选用抗耐病品种 | 第27-28页 |
1.8.2 种子消毒处理 | 第28页 |
1.8.3 田间栽培管理 | 第28页 |
1.8.4 防治蚜虫 | 第28-29页 |
1.8.5 药剂防治 | 第29页 |
1.9 本研究的目的和意义 | 第29-30页 |
2 材料与方法 | 第30-43页 |
2.1 供试寄主植物 | 第30-31页 |
2.2 防治病毒药剂 | 第31-32页 |
2.3 主要试剂及溶液配制 | 第32页 |
2.4 主要仪器 | 第32-33页 |
2.5 病害调查与病样采集 | 第33页 |
2.6 小RNA深度测序 | 第33页 |
2.7 样品中RNA提取 | 第33-34页 |
2.8 病毒RT-PCR检测引物的筛选 | 第34-36页 |
2.8.1 检测与验证病毒的引物 | 第34页 |
2.8.2 cDNA合成 | 第34-35页 |
2.8.3 RT-PCR扩增反应 | 第35页 |
2.8.4 RT-PCR产物胶回收 | 第35页 |
2.8.5 连接反应 | 第35-36页 |
2.8.6 连接产物转化反应 | 第36页 |
2.8.7 菌落RT-PCR鉴定 | 第36页 |
2.8.8 序列比对及引物筛选 | 第36页 |
2.9 辣椒病样中病毒种类RT-PCR检测 | 第36-37页 |
2.9.1 病样总RNA提取 | 第36-37页 |
2.9.2 cDNA合成 | 第37页 |
2.9.3 RT-PCR扩增 | 第37页 |
2.10 ChiVMV-GD基因组全序列克隆 | 第37-41页 |
2.10.1 引物设计 | 第37-38页 |
2.10.2 特异片段的克隆 | 第38页 |
2.10.2.1 cDNA合成 | 第38页 |
2.10.2.2 各片段RT-PCR扩增反应 | 第38页 |
2.10.2.3 各片段RT-PCR产物胶回收 | 第38页 |
2.10.2.4 连接产物转化 | 第38页 |
2.10.3 ChiVMV-GD 3'末端克隆 | 第38-41页 |
2.10.3.1 ChiVMV-GD 3'末端扩增 | 第38-39页 |
2.10.3.2 RT-PCR产物胶回收 | 第39-40页 |
2.10.3.3 3'端克隆反应 | 第40页 |
2.10.3.4 菌落RT-PCR鉴定 | 第40页 |
2.10.3.5 序列拼接与比较分析 | 第40-41页 |
2.11 ChiVMV寄主范围测定 | 第41页 |
2.11.1 ChiVMV分离纯化 | 第41页 |
2.11.2 寄主范围鉴定 | 第41页 |
2.12 辣椒品种的抗病性鉴定 | 第41-42页 |
2.12.1 试验处理 | 第41页 |
2.12.2 接种方法 | 第41-42页 |
2.12.3 各辣椒品种发病情况调查 | 第42页 |
2.13 植物病毒病药剂的防治效果评价 | 第42-43页 |
2.13.1 试验处理 | 第42页 |
2.13.2 接种及施药方法 | 第42-43页 |
2.13.3 各药剂防效调查 | 第43页 |
3 结果与分析 | 第43-66页 |
3.1 广东辣椒病毒病发生与为害情况 | 第43-44页 |
3.2 小RNA深度测序结果 | 第44-47页 |
3.2.1 茂名辣椒病样小RNA深度测序结果 | 第44-46页 |
3.2.2 梅州辣椒病样小RNA深度测序结果 | 第46页 |
3.2.3 韶关辣椒病样小RNA深度测序结果 | 第46-47页 |
3.3 RT-PCR检测引物筛选结果 | 第47-52页 |
3.4 广东各地辣椒病样RT-PCR检测结果 | 第52-57页 |
3.4.1 广东辣椒病样中病毒种类检测结果 | 第52-54页 |
3.4.2 17种病毒的检出率及其分布情况 | 第54-56页 |
3.4.3 广东辣椒病样中病毒侵染情况 | 第56页 |
3.4.4 8 个地区辣椒病样中病毒复合侵染情况 | 第56-57页 |
3.5 ChiVMV-GD基因组全序列扩增 | 第57-62页 |
3.5.1 基因组结构分析 | 第57-58页 |
3.5.2 同源性分析 | 第58-62页 |
3.6 ChiVMV的寄主范围及症状表现 | 第62-63页 |
3.7 辣椒品种对ChiVMV-GD的抗性鉴定 | 第63-64页 |
3.8 植物病毒病药剂对辣椒病毒病的防效评价 | 第64-66页 |
4 结论与讨论 | 第66-75页 |
4.1 侵染为害广东辣椒的病毒主要种类 | 第66-68页 |
4.2 应用小RNA深度测序检测与鉴定病毒 | 第68-72页 |
4.2.1 小RNA深度测序技术 | 第68-69页 |
4.2.2 发现我国大陆地区病毒新纪录 | 第69-72页 |
4.2.2.1 辣椒黄化卷叶病毒(Pepper yellow leaf curl virus,PYLCV) | 第69-70页 |
4.2.2.2 甜菜西方黄化病毒(Beet western yellows Virus ,BWYV) | 第70页 |
4.2.2.3 Glotospov(Gloxinia tospovirus) | 第70-71页 |
4.2.2.4 甜椒(辣椒)内源病毒(Bell pepper endornavirus,BPEV) | 第71页 |
4.2.2.5 内源病毒NtoEPRVs | 第71-72页 |
4.3 关于内源病毒 | 第72页 |
4.4 ChiVMV广东分离物的遗传特征及其致病性 | 第72-73页 |
4.5 辣椒品种对ChiVMV-GD的抗病性结果 | 第73-74页 |
4.6 植物病毒病药剂对辣椒病毒病的防治效果 | 第74-75页 |
5 总结论及进一步研究的建议 | 第75-76页 |
5.1 总结论 | 第75页 |
5.2 进一步研究的建议 | 第75-76页 |
参考文献 | 第76-86页 |
致谢 | 第86-87页 |
附录 | 第87-95页 |