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侵染广东辣椒的病毒种类鉴定及病毒病药剂防控效果评价

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
缩写词及中英文对照第8-14页
1 前言第14-30页
    1.1 辣椒病毒病的危害第14-15页
    1.2 为害辣椒的病毒种类第15-16页
    1.3 为害中国辣椒的病毒种类及其发生特点第16-17页
        1.3.1 为害中国辣椒的病毒种类第16-17页
        1.3.2 我国辣椒病毒病发生特点第17页
    1.4 侵染辣椒的几种重要病毒第17-22页
        1.4.1 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)第17-18页
        1.4.2 黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)第18页
        1.4.3 辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus,PMMoV)第18-19页
        1.4.4 马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)第19页
        1.4.5 甜椒脉斑驳病毒(Pepper veinal mottle virus,PVMV)第19页
        1.4.6 蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus 2,BBWV-2)第19-20页
        1.4.7 辣椒叶脉斑驳病毒(Chilli veinal mottle virus,ChiVMV)第20-22页
    1.5 广东省辣椒病毒病研究进展第22-23页
    1.6 辣椒病毒病检测及鉴定技术第23-26页
        1.6.1 生物学检测法第23页
        1.6.2 电镜检测技术第23-24页
        1.6.3 血清学方法第24页
        1.6.4 分子生物学检测技术第24-26页
            1.6.4.1 核酸杂交技术第24-25页
            1.6.4.2 多聚酶链式反应(RT-PCR)第25页
            1.6.4.3 实时荧光定量RT-PCR第25-26页
            1.6.4.4 DNA微列阵技术第26页
    1.7 小RNA深度测序技术第26-27页
    1.8 辣椒病毒病的防治第27-29页
        1.8.1 选用抗耐病品种第27-28页
        1.8.2 种子消毒处理第28页
        1.8.3 田间栽培管理第28页
        1.8.4 防治蚜虫第28-29页
        1.8.5 药剂防治第29页
    1.9 本研究的目的和意义第29-30页
2 材料与方法第30-43页
    2.1 供试寄主植物第30-31页
    2.2 防治病毒药剂第31-32页
    2.3 主要试剂及溶液配制第32页
    2.4 主要仪器第32-33页
    2.5 病害调查与病样采集第33页
    2.6 小RNA深度测序第33页
    2.7 样品中RNA提取第33-34页
    2.8 病毒RT-PCR检测引物的筛选第34-36页
        2.8.1 检测与验证病毒的引物第34页
        2.8.2 cDNA合成第34-35页
        2.8.3 RT-PCR扩增反应第35页
        2.8.4 RT-PCR产物胶回收第35页
        2.8.5 连接反应第35-36页
        2.8.6 连接产物转化反应第36页
        2.8.7 菌落RT-PCR鉴定第36页
        2.8.8 序列比对及引物筛选第36页
    2.9 辣椒病样中病毒种类RT-PCR检测第36-37页
        2.9.1 病样总RNA提取第36-37页
        2.9.2 cDNA合成第37页
        2.9.3 RT-PCR扩增第37页
    2.10 ChiVMV-GD基因组全序列克隆第37-41页
        2.10.1 引物设计第37-38页
        2.10.2 特异片段的克隆第38页
            2.10.2.1 cDNA合成第38页
            2.10.2.2 各片段RT-PCR扩增反应第38页
            2.10.2.3 各片段RT-PCR产物胶回收第38页
            2.10.2.4 连接产物转化第38页
        2.10.3 ChiVMV-GD 3'末端克隆第38-41页
            2.10.3.1 ChiVMV-GD 3'末端扩增第38-39页
            2.10.3.2 RT-PCR产物胶回收第39-40页
            2.10.3.3 3'端克隆反应第40页
            2.10.3.4 菌落RT-PCR鉴定第40页
            2.10.3.5 序列拼接与比较分析第40-41页
    2.11 ChiVMV寄主范围测定第41页
        2.11.1 ChiVMV分离纯化第41页
        2.11.2 寄主范围鉴定第41页
    2.12 辣椒品种的抗病性鉴定第41-42页
        2.12.1 试验处理第41页
        2.12.2 接种方法第41-42页
        2.12.3 各辣椒品种发病情况调查第42页
    2.13 植物病毒病药剂的防治效果评价第42-43页
        2.13.1 试验处理第42页
        2.13.2 接种及施药方法第42-43页
        2.13.3 各药剂防效调查第43页
3 结果与分析第43-66页
    3.1 广东辣椒病毒病发生与为害情况第43-44页
    3.2 小RNA深度测序结果第44-47页
        3.2.1 茂名辣椒病样小RNA深度测序结果第44-46页
        3.2.2 梅州辣椒病样小RNA深度测序结果第46页
        3.2.3 韶关辣椒病样小RNA深度测序结果第46-47页
    3.3 RT-PCR检测引物筛选结果第47-52页
    3.4 广东各地辣椒病样RT-PCR检测结果第52-57页
        3.4.1 广东辣椒病样中病毒种类检测结果第52-54页
        3.4.2 17种病毒的检出率及其分布情况第54-56页
        3.4.3 广东辣椒病样中病毒侵染情况第56页
        3.4.4 8 个地区辣椒病样中病毒复合侵染情况第56-57页
    3.5 ChiVMV-GD基因组全序列扩增第57-62页
        3.5.1 基因组结构分析第57-58页
        3.5.2 同源性分析第58-62页
    3.6 ChiVMV的寄主范围及症状表现第62-63页
    3.7 辣椒品种对ChiVMV-GD的抗性鉴定第63-64页
    3.8 植物病毒病药剂对辣椒病毒病的防效评价第64-66页
4 结论与讨论第66-75页
    4.1 侵染为害广东辣椒的病毒主要种类第66-68页
    4.2 应用小RNA深度测序检测与鉴定病毒第68-72页
        4.2.1 小RNA深度测序技术第68-69页
        4.2.2 发现我国大陆地区病毒新纪录第69-72页
            4.2.2.1 辣椒黄化卷叶病毒(Pepper yellow leaf curl virus,PYLCV)第69-70页
            4.2.2.2 甜菜西方黄化病毒(Beet western yellows Virus ,BWYV)第70页
            4.2.2.3 Glotospov(Gloxinia tospovirus)第70-71页
            4.2.2.4 甜椒(辣椒)内源病毒(Bell pepper endornavirus,BPEV)第71页
            4.2.2.5 内源病毒NtoEPRVs第71-72页
    4.3 关于内源病毒第72页
    4.4 ChiVMV广东分离物的遗传特征及其致病性第72-73页
    4.5 辣椒品种对ChiVMV-GD的抗病性结果第73-74页
    4.6 植物病毒病药剂对辣椒病毒病的防治效果第74-75页
5 总结论及进一步研究的建议第75-76页
    5.1 总结论第75页
    5.2 进一步研究的建议第75-76页
参考文献第76-86页
致谢第86-87页
附录第87-95页

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