| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 引言 | 第13-19页 |
| 1. 我国草鱼养殖概况 | 第13页 |
| 2. 草鱼呼肠孤病毒 | 第13-18页 |
| 2.1 草鱼呼肠孤病毒的发现 | 第14页 |
| 2.2 草鱼呼肠孤病毒的形态结构及理化特性 | 第14-15页 |
| 2.3 草鱼呼肠孤病毒感染的组织嗜性和病理变化 | 第15-16页 |
| 2.4 草鱼呼肠孤病毒编码蛋白的免疫原性 | 第16页 |
| 2.5 草鱼呼肠孤病毒的检测方法 | 第16-17页 |
| 2.6 草鱼呼肠孤病毒的防治措施 | 第17-18页 |
| 3. 本文研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 第一章 Ⅱ型GCRV外衣壳蛋白基因S6的原核表达,多克隆抗体的制备,免疫原性及其相互作用宿主蛋白分析试验 | 第19-31页 |
| 1. 材料与方法 | 第19-25页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第19页 |
| 1.2 试验病毒及细胞 | 第19-20页 |
| 1.3 试验试剂及药品 | 第20页 |
| 1.4 所用软件 | 第20页 |
| 1.5 目的基因的克隆 | 第20-22页 |
| 1.5.1 总RNA的提取及cDNA第1条链的合成 | 第20-21页 |
| 1.5.2 引物设计及目的基因的扩增 | 第21-22页 |
| 1.6 重组表达质粒的构建、表达及纯化 | 第22-23页 |
| 1.6.1 VP4原核表达质粒及诱饵质粒的构建 | 第22页 |
| 1.6.2 诱导表达及可溶性分析 | 第22-23页 |
| 1.6.3 目的蛋白纯化 | 第23页 |
| 1.7 多克隆抗体的制备和鉴定 | 第23页 |
| 1.7.1 多克隆抗体的制备 | 第23页 |
| 1.7.2 血清抗体特异性分析 | 第23页 |
| 1.8 基于rVP4的病毒诱导抗体的免疫学检测 | 第23-24页 |
| 1.9 酵母双杂交筛选与VP4可能相互作用的宿主蛋白 | 第24-25页 |
| 1.9.1 诱饵重组质粒和文库质粒转染酵母菌AH109 | 第24页 |
| 1.9.2 pGBKT7-VP4自激活检测 | 第24页 |
| 1.9.3 营养缺陷培养基筛选阳性菌落 | 第24-25页 |
| 1.9.4 质粒pGADT7插入片段 | 第25页 |
| 2. 结果 | 第25-29页 |
| 2.1 S6目的基因的扩增 | 第25页 |
| 2.2 重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| 2.3 重组蛋白rVP4的诱导表达及可溶性分析 | 第26页 |
| 2.4 rVP4表达条件的优化及纯化 | 第26-27页 |
| 2.5 多克隆抗体的制备及其特异性分析 | 第27-28页 |
| 2.6 基于rVP4的病毒诱导抗体的免疫学检测 | 第28页 |
| 2.7 诱饵重组质粒pGBKT7-VP4自激活检测 | 第28页 |
| 2.8 营养缺陷培养基筛选阳性菌落 | 第28-29页 |
| 2.9 阳性菌落中质粒pGADT7插入片段测序结果分析 | 第29页 |
| 3. 讨论 | 第29-31页 |
| 第二章 Ⅱ型GCRV外衣壳蛋白基因S11的原核表达,多克隆抗体的制备,免疫原性及其相互作用宿主蛋白分析试验 | 第31-40页 |
| 1. 材料与方法 | 第31-33页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第31页 |
| 1.2 试验病毒及细胞 | 第31页 |
| 1.3 试验试剂及药品 | 第31页 |
| 1.4 所用软件 | 第31页 |
| 1.5 目的基因的克隆 | 第31-32页 |
| 1.5.1 总RNA的提取及cDNA第1条链的合成 | 第31页 |
| 1.5.2 引物设计及目的基因的扩增 | 第31-32页 |
| 1.6 重组表达质粒的构建、表达及纯化 | 第32页 |
| 1.6.1 VP35原核表达质粒及诱饵质粒的构建 | 第32页 |
| 1.6.2 诱导表达及可溶性分析 | 第32页 |
| 1.6.3 目的蛋白纯化 | 第32页 |
| 1.7 多克隆抗体的制备和鉴定 | 第32-33页 |
| 1.7.1 多克隆抗体的制备 | 第32页 |
| 1.7.2 血清抗体特异性分析 | 第32-33页 |
| 1.8 基于rVP35的病毒诱导抗体的免疫学检测 | 第33页 |
| 1.9 酵母双杂交筛选与VP35可能相互作用的宿主蛋白 | 第33页 |
| 1.9.1 诱饵重组质粒和文库质粒转化酵母菌AH109 | 第33页 |
| 1.9.2 pGBKT7-VP35自激活检测 | 第33页 |
| 1.9.3 营养缺陷培养基筛选阳性菌落 | 第33页 |
| 1.9.4 质粒pGADT7插入片段 | 第33页 |
| 2. 结果 | 第33-38页 |
| 2.1 S11目的基因的扩增 | 第33-34页 |
| 2.2 重组质粒的构建 | 第34页 |
| 2.3 重组蛋白rVP35的诱导表达及可溶性分析 | 第34-35页 |
| 2.4 rVP35表达条件的优化及纯化 | 第35-36页 |
| 2.5 多克隆抗体的制备及其特异性分析 | 第36页 |
| 2.6 基于rVP35的病毒诱导抗体的免疫学检测 | 第36页 |
| 2.7 诱饵重组质粒pGBKT7-VP35自激活检测 | 第36-37页 |
| 2.8 营养缺陷培养基筛选阳性菌落 | 第37页 |
| 2.9 阳性菌落中质粒pGADT7插入片段测序结果分析 | 第37-38页 |
| 3. 讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 Ⅱ型GCRV外衣壳蛋白基因S7的原核表达,多克隆抗体的制备及其相互作用宿主蛋白分析试验 | 第40-50页 |
| 1. 材料与方法 | 第40-43页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第40页 |
| 1.2 试验病毒及细胞 | 第40页 |
| 1.3 试验试剂及药品 | 第40页 |
| 1.4 所用软件 | 第40页 |
| 1.5 目的基因的克隆 | 第40-41页 |
| 1.5.1 总RNA的提取及cDNA第1条链的合成 | 第40-41页 |
| 1.5.2 引物设计及目的基因的扩增 | 第41页 |
| 1.6 重组表达质粒的构建、表达及纯化 | 第41-42页 |
| 1.6.1 VP56原核表达质粒及诱饵质粒的构建 | 第41页 |
| 1.6.2 诱导表达及可溶性分析 | 第41-42页 |
| 1.6.3 目的蛋白纯化 | 第42页 |
| 1.7 多克隆抗体的制备和鉴定 | 第42页 |
| 1.7.1 多克隆抗体的制备 | 第42页 |
| 1.7.2 血清抗体特异性分析 | 第42页 |
| 1.8 酵母双杂交筛选与VP56可能相互作用的宿主蛋白 | 第42-43页 |
| 1.8.1 诱饵重组质粒和文库质粒转染酵母菌AH109 | 第42页 |
| 1.8.2 pGBKT7-VP56自激活检测 | 第42页 |
| 1.8.3 营养缺陷培养基筛选阳性菌落 | 第42页 |
| 1.8.4 质粒pGADT7插入片段 | 第42-43页 |
| 1.9 在酵母中鉴定蛋白VP56和Gc-JAM-A相互作用 | 第43页 |
| 2. 结果 | 第43-48页 |
| 2.1 S7和GcJAM-A目的基因的扩增 | 第43页 |
| 2.2 重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| 2.3 重组蛋白rVP56的诱导表达及可溶性分析 | 第44页 |
| 2.4 rVP56表达条件的优化及纯化 | 第44-45页 |
| 2.5 多克隆抗体的制备及其特异性分析 | 第45-46页 |
| 2.6 诱饵重组质粒pGBKT7-VP56自激活检测 | 第46页 |
| 2.7 营养缺陷培养基筛选阳性菌 | 第46-47页 |
| 2.8 阳性菌落中质粒pGADT7插入片段测序结果分析 | 第47页 |
| 2.9 在酵母中鉴定蛋白VP56和Gc-JAM-A相互作用 | 第47-48页 |
| 3. 讨论 | 第48-50页 |
| 第四章 Ⅱ型GCRV中VP56缺失株的鉴定与分析 | 第50-57页 |
| 1. 材料与方法 | 第50-52页 |
| 1.1 主要仪器设备 | 第50页 |
| 1.2 试验病毒及细胞 | 第50页 |
| 1.3 试验试剂及药品 | 第50页 |
| 1.4 所用软件 | 第50-51页 |
| 1.5 JX02 S1-S9序列ORF的克隆 | 第51-52页 |
| 1.5.1 总RNA的提取及cDNA第1条链的合成 | 第51页 |
| 1.5.2 引物设计及JX02 S1-S9序列ORF的扩增 | 第51-52页 |
| 1.5.3 JX02 S1-S9序列ORF的测序和分析 | 第52页 |
| 1.6 JX02和JX02W S7基因比较 | 第52页 |
| 1.7 利用多抗血清检测JX02 VP56蛋白 | 第52页 |
| 2. 结果 | 第52-55页 |
| 2.1 JX02 S1-S9序列ORF的扩增和分析 | 第52-54页 |
| 2.2 JX02和JX02W S7基因的比对 | 第54-55页 |
| 2.3 利用多抗血清检测JX02 VP56蛋白 | 第55页 |
| 3. 讨论 | 第55-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 发表论文 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
