| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩写词中英文对照表 | 第11-12页 |
| 引言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-26页 |
| 1.1 RNA干扰技术 | 第13-16页 |
| 1.1.1 RNAi的发现和发展 | 第13页 |
| 1.1.2 RNAi的作用原理 | 第13-14页 |
| 1.1.3 RNAi的作用特征特点 | 第14-15页 |
| 1.1.4 RNAi技术的分类 | 第15页 |
| 1.1.5 植物遗传改良中RNAi技术的研究进展及其应用 | 第15-16页 |
| 1.2 精氨酸激酶（AK）的研究现状 | 第16-19页 |
| 1.2.1 精氨酸激酶（AK）的分子结构 | 第16-17页 |
| 1.2.2 精氨酸激酶（AK）的生物学功能 | 第17页 |
| 1.2.3 精氨酸激酶（AK）基因的研究进展 | 第17-18页 |
| 1.2.4 精氨酸激酶（AK）的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 几丁质酶（CHI）的研究现状 | 第19-23页 |
| 1.3.1 几丁质酶的分子结构 | 第20-21页 |
| 1.3.2 几丁质酶（CHI）的生物学功能 | 第21页 |
| 1.3.3 昆虫几丁质酶基因的研究进展 | 第21-22页 |
| 1.3.4 昆虫几丁质酶基因的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 棉叶螨的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4.1 棉叶螨的危害症状 | 第23页 |
| 1.4.2 棉叶螨的发病原因及规律 | 第23页 |
| 1.4.3 棉叶螨的防治 | 第23-24页 |
| 1.5 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 第二章 材料和方法 | 第26-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第26页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 棉花及烟草DNA的提取 | 第27页 |
| 2.2.2 烟草RNA提取 | 第27-28页 |
| 2.2.3 RNA的完整性检验 | 第28页 |
| 2.2.4 去除RNA基因组中DNA | 第28-29页 |
| 2.2.5 RNA反转录为cDNA | 第29-30页 |
| 2.3 植物表达干扰载体的构建 | 第30-34页 |
| 2.3.1 引物设计 | 第30页 |
| 2.3.2 PCR扩增 | 第30-31页 |
| 2.3.3 连接克隆载体pMD18-T | 第31页 |
| 2.3.4 Top10大肠杆菌感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.5 连接产物转化大肠杆菌 | 第32页 |
| 2.3.6 质粒DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.7 重组质粒的鉴定 | 第33页 |
| 2.3.8 pMD18-AK-CHI载体构建 | 第33页 |
| 2.3.9 用Gatway技术构建双基因RNAi干扰载体 | 第33-34页 |
| 2.4 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第34-40页 |
| 2.4.1 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.4.2 根癌农杆菌感受态的电击转化 | 第35页 |
| 2.4.3 烟草的遗传转化及鉴定 | 第35-40页 |
| 2.5 陆地棉YZ-1 号的遗传转化 | 第40-42页 |
| 2.5.1 菌液制备 | 第40页 |
| 2.5.2 无菌苗培养 | 第40-41页 |
| 2.5.3 愈伤诱导及筛选 | 第41页 |
| 2.5.4 胚性愈伤组织诱导培养及胚状体诱导生根 | 第41页 |
| 2.5.5 抗性胚性愈伤PCR验证 | 第41-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-55页 |
| 3.1 基因的克隆与分析 | 第42-43页 |
| 3.1.1 靶标基因功能区域片段的克隆 | 第42-43页 |
| 3.2 构建载体 | 第43-47页 |
| 3.2.1 pMD18-AK-CHI载体构建验证 | 第43-44页 |
| 3.2.2 BP反应后阳性克隆的鉴定 | 第44-45页 |
| 3.2.3 LR反应后阳性克隆的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2.4 表达干扰载体转化农杆菌 | 第46-47页 |
| 3.3 烟草的遗传转化 | 第47-53页 |
| 3.3.1 烟草遗传转化过程 | 第47-48页 |
| 3.3.2 抗性烟草PCR验证 | 第48页 |
| 3.3.3 T_0代转基因烟草的种子筛选 | 第48-49页 |
| 3.3.4 T_1代转基因烟草RNA的提取和验证 | 第49-50页 |
| 3.3.5 T_1代转基因烟草RNA反转录与QRT-PCR定量分析 | 第50页 |
| 3.3.6 转基因T_1代烟草融合片段TtAK与TtCHI对土耳其斯坦叶螨的抗性分析 | 第50-53页 |
| 3.4 棉花遗传转化 | 第53-55页 |
| 3.4.1 抗性棉花的诱导和培养 | 第53-54页 |
| 3.4.2 抗性胚性愈伤PCR验证 | 第54-55页 |
| 第四章 讨论 | 第55-57页 |
| 4.1 利用双基因的RNA干扰技术 | 第55页 |
| 4.2 双基因沉默后的抗虫性 | 第55-56页 |
| 4.3 农杆菌侵染棉花 | 第56-57页 |
| 第五章 总结与展望 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 附录 | 第63-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67-68页 |
| 附件 | 第68页 |
