| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-36页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 决定肌肉生长发育的生物学事件 | 第16-19页 |
| 2.1 出生前生长：成肌细胞分化 | 第17-18页 |
| 2.2 出生后生长：卫星细胞融合与蛋白质沉积 | 第18-19页 |
| 3 蛋白质的生物合成及蛋白质合成速率的调控 | 第19-28页 |
| 3.1 蛋白质翻译起始及调控翻译起始速率的主要信号通路 | 第20-23页 |
| 3.1.1 mTOR信号通路 | 第20-21页 |
| 3.1.2 eIF2 信号通路 | 第21-22页 |
| 3.1.3 myostatin-Smad信号通路 | 第22-23页 |
| 3.2 蛋白质翻译延长及翻译延长速率的调控 | 第23-26页 |
| 3.3 蛋白质合成与降解的互作调控 | 第26-28页 |
| 3.3.1 促进蛋白质合成并抑制蛋白质降解的节点 | 第26-27页 |
| 3.3.2 促进蛋白质降解并抑制蛋白质合成的节点 | 第27-28页 |
| 4 检测蛋白质合成的方法 | 第28-31页 |
| 4.1 同位素示踪法 | 第28-29页 |
| 4.2 SUnSET非放射方法 | 第29-30页 |
| 4.3 多聚核糖体分析技术与核糖体分析技术 | 第30-31页 |
| 5 转录因子JunB的研究进展 | 第31-34页 |
| 5.1 JunB的生化特征 | 第32-33页 |
| 5.1.1 JunB的基本结构及其DNA识别序列 | 第32页 |
| 5.1.2 JunB活性的调控 | 第32-33页 |
| 5.2 JunB的功能研究 | 第33-34页 |
| 5.2.1 JunB调控细胞增殖 | 第33页 |
| 5.2.2 JunB调控肿瘤生成 | 第33-34页 |
| 5.2.3 JunB调控骨骼肌蛋白质合成 | 第34页 |
| 6 研究假设的提出及研究的目的意义 | 第34-36页 |
| 第二章 运用SUnSET非放射性方法研究蛋白质翻译及检测蛋白质合成速率 | 第36-50页 |
| 1 前言 | 第36-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-41页 |
| 2.1 试验材料 | 第37-38页 |
| 2.1.1 细胞 | 第37页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第38页 |
| 2.2 试验方法 | 第38-41页 |
| 2.2.1 试剂配制 | 第38-39页 |
| 2.2.2 细胞培养 | 第39页 |
| 2.2.3 试验设计 | 第39-40页 |
| 2.2.4 蛋白样品的制备 | 第40页 |
| 2.2.5 Western Blot分析及灰度扫描并作图 | 第40-41页 |
| 2.2.6 统计分析 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-46页 |
| 3.1 确定孵育C2C12 肌管的最佳嘌呤霉素浓度 | 第41-42页 |
| 3.2 运用SUnSET方法检测胰岛素和雷帕霉素对C2C12 肌管蛋白质合成速率的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 运用SUnSET方法检测CCCP对C2C12 成肌细胞蛋白质合成速率的影响 | 第43-44页 |
| 3.4 运用SUnSET方法检测饥饿对C2C12 成肌细胞蛋白质合成速率的影响 | 第44-45页 |
| 3.5 运用SUnSET方法检测不同条件处理对C3H10T1/2 细胞蛋白质合成速率的影响 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 嘌呤霉素浓度及含嘌呤霉素的培养基的选择 | 第46-47页 |
| 4.2 SUnSET方法检测由翻译起始速率引起的蛋白质合成速率的变化 | 第47页 |
| 4.3 SUnSET方法检测由翻译延长速率引起的蛋白质合成速率的变化 | 第47-48页 |
| 4.4 SUnSET方法检测由翻译起始和延长速率引起的蛋白质合成速率的变化 | 第48-49页 |
| 4.5 小结 | 第49-50页 |
| 第三章 转录因子JunB调控C2C12 细胞蛋白质合成机制的研究 | 第50-75页 |
| 1 前言 | 第50-51页 |
| 2 材料与方法 | 第51-61页 |
| 2.1 技术路线 | 第51-52页 |
| 2.2 试验材料 | 第52-53页 |
| 2.2.1 细胞、菌株及质粒 | 第52页 |
| 2.2.2 主要试剂和试剂盒 | 第52页 |
| 2.2.3 主要仪器 | 第52-53页 |
| 2.3 试验方法 | 第53-61页 |
| 2.3.1 试剂配制 | 第53-54页 |
| 2.3.2 细胞培养 | 第54页 |
| 2.3.3 试验设计 | 第54页 |
| 2.3.4 蛋白样品的制备 | 第54页 |
| 2.3.5 Western Blot分析及灰度扫描并作图 | 第54-55页 |
| 2.3.6 质粒构建 | 第55-60页 |
| 2.3.7 总RNA提取、纯化和反转录 | 第60页 |
| 2.3.8 荧光定量PCR | 第60页 |
| 2.3.9 统计分析 | 第60-61页 |
| 3 结果与分析 | 第61-72页 |
| 3.1 构建JunB过表达质粒并在C2C12 成肌细胞验证过表达效果 | 第61-63页 |
| 3.1.1 JunB过表达质粒的构建 | 第61页 |
| 3.1.2 Q-PCR和Western Blot鉴定JunB过表达效果 | 第61-62页 |
| 3.1.3 C2C12 成肌细胞分化过程中JunB的表达模式 | 第62-63页 |
| 3.2 JunB siRNA的设计合成、筛选及敲低效果验证 | 第63页 |
| 3.3 运用SUnSET非放射性方法检测JunB对C2C12 细胞蛋白质合成的影响 | 第63-64页 |
| 3.4 检测JunB是否通过Akt/mTOR影响C2C12 细胞蛋白质合成 | 第64-65页 |
| 3.5 检测JunB对核糖体生成的影响 | 第65-66页 |
| 3.6 检测JunB对翻译起始因子eIF2a蛋白磷酸化的影响 | 第66-67页 |
| 3.7 检测JunB对翻译延长的影响 | 第67-69页 |
| 3.8 检测JunB对myostatin-Smad信号通路的影响 | 第69-70页 |
| 3.9 检测myostatin通路对翻译延长的影响 | 第70-71页 |
| 3.10 HEK293T细胞异位表达JunB | 第71-72页 |
| 4 讨论与小结 | 第72-75页 |
| 4.1 JunB不影响mTOR通路通过调控eEF2 活性调控蛋白质合成 | 第72页 |
| 4.2 JunB通过调控eEF2K(Ser359)活性调控eEF2 活性 | 第72-73页 |
| 4.3 JunB通过调控myostatin-Smad信号通路调控蛋白质合成速率 | 第73-74页 |
| 4.4 小结 | 第74-75页 |
| 第四章 结语 | 第75-76页 |
| 1 研究结论 | 第75页 |
| 2 创新点与特色 | 第75页 |
| 3 本研究的不足与进一步工作的设想 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
